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γ-氨基丁酸代谢调控拟南芥根毛发育的分子机制研究

摘要根毛(Roothair)是根部表皮细胞突起形成的单细胞管状结构,对于植物获取营养、与微生物互作以及在土壤中的固定非常重要。目前已知参与根毛发育的调控途径主要包括,转录因子CAPRICE(CPC)和WEREWOLF(WER)主导的命运特异化调控途径、生长素(Auxin)调控途径、乙烯(Ethylene)调控途径和活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)参与的调控途径等。γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyricacid,GABA)是一种四碳的非蛋白质氨基酸,在胁迫的条件下会大量积累,作为一种代谢物对ROS进行清除,提高植物对氧化胁迫的耐受性。同时也可作为一种信号分子影响植物的发育。<br>  本研究以模式植物拟南芥内源性GABA合成缺陷型突变体gad1为研究材料,通过对根毛长度和密度的测量、ROS的染色、酶活的测定和相关基因表达水平的测定,对gad1突变体调控根毛发育的分子机制进行了初步研究。实验结果如下:<br>  1.根毛长度和密度测量的结果显示,gad1突变体根毛的长度和密度明显高于野生型,野生型和gad1突变体根毛的长度和密度会受外源性GABA的明显抑制,但是生毛细胞(Trichoblast)的长度不会受到影响。说明gad1突变可以影响根毛的形成。<br>  2.为阐明突变体背景下根毛生长和ROS的相关性,运用荧光染料(H2DCFDA)对根部ROS的整体水平进行荧光染色,利用化学染料氮蓝四唑(Nitro-bluetetrazolium,NBT)和二氨基联苯氨(3,3’-diaminobenzidine,DAB)分别对O2-和H2O2进行染色,发现在gad1突变体中荧光强度和化学染色程度均高于野生型,但在外源性GABA处理下会降低;ROS和H2O2的定量分析结果与染色结果一致。说明gad1突变能影响根尖和根毛区域ROS的含量,其中包括O2-和H2O2的含量。<br>  3.对存在于O2-和H2O2下游的·OH的产生能力进行测定,在gad1突变体中·OH的产生能力要高于野生型,在外源性GABA处理下产·OH的能力降低。所以,在gad1突变体中根毛长度的增加可能是由于·OH含量升高所导致的。<br>  4.为进一步分析gad1突变体中H2O2含量改变的原因,我们发现在gad1突变体中清除H2O2的酶APX和CAT的活性要低于野生型,外源性GABA可以诱导APX和CAT的活性上升。说明gad1突变体中较高的H2O2水平可能与APX和CAT参与H2O2的清除能力下降有关。<br>  5.qRT-PCR对合成和清除ROS相关基因的表达水平进行检测,结果显示,ROS合成相关基因的表达没有受到影响,但是超氧化物歧化酶基因MSD1、CSD1和CSD2的表达量受到抑制,外源性GABA可以提高其表达量。说明gad1突变体中O2-含量的升高是由于其清除基因的表达受到抑制所致。<br>  6.在gad1突变体中根毛分化相关基因SCM1、TRY、ETC1和光敏色素(Phytochrome,PHY)家族中的PHYA和PHYB基因的表达受到明显诱导,暗示gad1突变可能还影响了根毛命运决定和光刺激根毛形成的过程,最终让更多的生毛细胞形成根毛,使根毛密度增加。

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