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摘要乳腺癌是发病率最高的女性常见肿瘤，具有高度异质性，乳腺癌细胞分泌的小胞外囊泡（Smallextracellularvesicle，sEV）是肿瘤微环境的重要组成成分，通过传递其携带的生物活性分子，可以促进乳腺肿瘤的远处转移和恶性进展，以及对化疗药物的耐受性。平分型GlcNAc是一种重要的N-糖基化修饰，在多种癌症的发生发展过程中异常表达，参与调控肿瘤细胞粘附及增殖等。本文针对平分型GlcNAc修饰调控乳腺癌细胞来源sEV的生物学功能，及其调控乳腺癌细胞耐药性的机制展开研究，以阐明平分型GlcNAc在乳腺癌发展以及耐药过程中的作用。<br>　　首先，为了明确平分型GlcNAc及其对应糖基转移酶MGAT3在乳腺癌发展中的生物学功能，在乳腺癌细胞中过表达MGAT3或用毛喉素处理，增加细胞内平分型GlcNAc水平，发现细胞增殖、迁移及克隆形成能力降低，而细胞凋亡增加；小鼠体内实验发现，高表达平分型GlcNAc的乳腺癌细胞由尾静脉向肺部远距离迁移的能力下降。说明高平分型GlcNAc修饰对乳腺癌细胞的恶性表型尤其是迁移能力有一定抑制作用。<br>　　随后，本研究发现高迁移性乳腺癌细胞MDA-MB-231来源的sEV能够促进低迁移性乳腺癌细胞MCF7的迁移能力，而供体细胞中平分型GlcNAc修饰水平的提高抑制了其分泌的sEV对受体细胞的促迁移功能。通过糖肽质谱以及免疫沉淀等技术，鉴定到乳腺癌细胞中整合蛋白β1（Integrinβ1）具有平分型GlcNAc修饰，且sEV也含有integrinβ1。受体细胞能够摄入sEV中的β1。当sEV中β1的平分型GlcNAc水平较低时，β1能够与受体细胞中的galectin3相互作用启动下游FAK/AKT信号通路，促进细胞迁移，而高平分型GlcNAc修饰抑制了β1与galectin3的结合，进而抑制下游信号通路的激活及sEV的促迁移功能；提取乳腺癌患者血浆中的sEV处理MCF7细胞，同样发现高平分型GlcNAc修饰，抑制了sEV对MCF7细胞的促迁移功能；小鼠体内实验证明，注射高平分型GlcNAc修饰的sEV组小鼠，MCF7细胞向肺部迁移数量及肺部肿瘤结节明显下降；以上结果说明高平分型GlcNAc修饰能够抑制sEV对MCF7细胞促迁移作用，这种调控是通过β1介导的。结合TCGA数据库分析发现β1上平分型GlcNAc修饰水平更高的病人，其生存期更长。<br>　　最后，本文探究了平分型GlcNAc对乳腺癌细胞耐药的影响。化疗药物处理能够增加MGAT3的泛素化修饰并加速其通过蛋白酶体途径降解，进而降低乳腺癌细胞中MGAT3的表达和平分型GlcNAc的含量；高平分型GlcNAc修饰的乳腺癌细胞对化疗药物更加敏感。与耐药细胞MCF7/Adr相比，过表达MGAT3的耐药细胞（7/Adr-M3）排出药物的速度减慢；进一步探究平分型GlcNAc修饰调控药物外排的分子机制，发现药物转运蛋白-P-糖蛋白（P-gp）带有平分型GlcNAc修饰，7/Adr-M3细胞中以及细胞膜上的P-gp含量呈下降趋势，平分型GlcNAc修饰促进P-gp从细胞膜进入胞质内，发生降解，进而导致细胞排出药物的速度减慢，耐药性降低。平分型GlcNAc通过影响P-gp的定位及表达调控细胞的药物耐受性。<br>　　综上，本文得到以下结论：平分型GlcNAc可以通过修饰integrinβ1调控sEV的促迁移功能，抑制乳腺癌细胞的恶性表型，高平分型GlcNAc修饰能够降低由P-gp介导的乳腺癌细胞耐药性。本研究为临床治疗迁移性乳腺癌提供了新的治疗靶点，并为克服P-gp介导的乳腺癌细胞耐药提供除小分子拮抗剂之外的治疗策略。