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摘要研究背景<br>　　研究表明，KRAS、p53突变与结肠癌远处转移有关，可能是结肠癌转移的潜在治疗靶点。溶瘤性新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）毒株柯萨奇病毒B3型（CVB3）对肺腺癌KRAS突变型细胞具有选择性杀伤作用。溶瘤腺病毒可以使细胞抑癌蛋白p53失活，在p53非功能性肿瘤中显示确定的抗肿瘤活性。既往研究证明，新城疫病毒毒株FMW（NDV/FMW）可对肺癌、甲状腺癌的溶瘤作用，诱导肿瘤细胞发生凋亡，通过调控AKT/mTOR/p70s6k信号通路促进肿瘤细胞自噬。进一步，有研究发现溶瘤NDV协同免疫检查点抑制剂抗癌。NDV感染导致免疫细胞活化，影响肿瘤微环境，肿瘤细胞表面CD80，PD-L1，HLA-DR等标记物上调和促炎因子分泌增加。<br>　　因此，我们探究了NDV/FMW作为溶瘤剂治疗结肠癌细胞的可能性，选择了p53基因表达缺失/KRAS野生型（p53-/KRASwt）的结肠癌细胞株Caco2，p53突变型/KRAS突变型（p53mut/KRASmut）结肠癌细胞株SW620,p53野生型/KRAS突变型（p53wt/KRASmut）结肠癌细胞株HCT116，p53野生型/KRAS野生型（p53wt/KRASwt）结肠癌细胞株RKO，进行实验研究。我们进一步研究了NDV/FMW对p53+/KRASmut结肠癌细胞PD-L1表达的影响。肿瘤细胞表达PD-L1水平主要通过IFN-JAK-STAT1-IRF1信号轴调节，我们进一步探究了NDV/FMW影响结肠癌细胞PD-L1表达水平与STAT1活性的相关性。<br>　　研究目的<br>　　1．明确p53/KRAS不同基因突变背景下NDV/FMW是否抑制结肠癌细胞增殖；<br>　　2．明确p53/KRAS不同基因突变背景下NDV/FMW是否诱导结肠癌细胞凋亡；<br>　　3．明确p53/KRAS不同基因突变背景下NDV/FMW是否促进结肠癌细胞自噬及其机制；<br>　　4．探究NDV/FMW是否靶向STAT1影响p53/KRAS不同基因突变结肠癌细胞PD-L1表达水平。<br>　　研究方法<br>　　1.通过病毒滴度检测NDV/FMW在结肠癌细胞内复制情况；<br>　　通过CCK8法检测NDV/FMW对p53/KRAS基因突变结肠癌细胞增殖的影响；<br>　　2.显微镜下观察NDV/FMW对3D培养p53/KRAS基因突变结肠癌细胞的溶瘤能力；<br>　　3.免疫印迹（Westernblot，WB）法检测凋亡相关蛋白Caspase-3,PARP表达水平；<br>　　4.自噬相关蛋白LC3B，p62表达水平及自噬相关信号通路AKT/mTOR/p70s6k蛋白表达的变化；<br>　　5.WB检测NDV/FMW对p53/KRAS基因突变结肠癌细胞表达PD-L1蛋白水平的变化以及STAT1的活性的变化。在HCT116中稳定敲除STAT1基因，检测NDV/FMW调节结肠癌细胞表达PD-L1水平对相关信号通路的影响。<br>　　研究结果<br>　　1.NDV/FMW在结肠癌细胞中复制；<br>　　2.NDV/FMW抑制结肠癌细胞增殖，并且在p53/KRAS基因突变背景下抑制增殖能力存在差异。NDV/FMW对p53-的结肠癌细胞Caco2抑制增殖作用最显著。在p53mut/KRASmut结肠癌细胞株（SW620）,p53wt/KRASmut结肠癌细胞株（HCT116）,p53wt/KRASwt结肠癌细胞株（RKO）中，无论p53基因状态，在p53+/KRASmut结肠癌HCT116和SW620细胞株抑制增殖作用较显著；但是，在p53+/KRASwt的RKO细胞株抑制增殖效果不显著；<br>　　3.NDV/FMW在体外对p53-的Caco2细胞株及p53+/KRASmut的HCT116和SW620细胞株3D培养结肠癌细胞具有溶瘤能力；<br>　　4.NDV/FMW诱导p53-的Caco2细胞株及p53+/KRASmut的HCT116和SW620细胞株发生凋亡；<br>　　5.NDV/FMW促进p53+/KRASmut结肠癌HCT116和SW620细胞株自噬，并调控mTOR/p70s6k信号通路；<br>　　6.NDV/FMW靶向STAT1上调p53+/KRASmut结肠癌HCT116细胞PD-L1表达水平。<br>　　研究结论<br>　　1.NDV/FMW优先在p53-和p53+/KRASmut结肠癌细胞抑制增殖及促进细胞凋亡；首先，NDV/FMW对p53-的结肠癌细胞溶瘤作用最显著。其次，无论p53基因状态，NDV/FMW选择性在p53+/KRASmut结肠癌细胞起到溶瘤作用，并通过mTOR/p70s6k信号通路促进肿瘤细胞自噬；最后，NDV/FMW对p53+/KRASwt结肠癌细胞溶瘤作用不显著；<br>　　2.NDV/FMW通过靶向STAT1上调p53+/KRASmut结肠癌细胞表达PD-L1水平。