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摘要目的：绞股蓝皂苷是从绞股蓝中提取出来的一系列达玛烷型三萜皂甙，是绞股蓝产生治疗作用的主要生物活性成分。绞股蓝皂苷被陆续报道有多种生物药理活性，包括抗肿瘤，抗氧化，抗炎，抗高血脂，以及抗焦虑等。绞股蓝皂苷的药理活性，活性结构类似物发现，药代动力学和体内存在是目前各个实验室争相研究的热点。近期研究表明绞股蓝皂苷LVI、绞股蓝皂苷XLVI、绞股蓝皂苷元、以及绞股蓝皂苷元的两个代谢产物Metabolites?1(M1)和Metabolites?2(M2)有很强的抗肿瘤作用。到目前为止，还没有关于这些化合物的生物分析或药代动力学研究。本文建立了同时定量测定生物样品中这五个化合物快速，灵敏的LC--MS/MS方法，并进行了方法学的确证。希望从药代动力学的角度来更好的说明其疗效和安全性，为临床前和临床研究打下基础。<br>　　知母皂苷B2(TB2)是从中药知母中提取出来的主要活性皂苷成分。知母皂苷A3(TA3)?和知母皂苷元(SSG)是知母皂苷B2在大鼠体内的主要代谢产物。之前研究表明TA3能够通过诱导氧化应激和下调胆酸转运体的方式引起大鼠肝损伤。然而，TB2给药后的大鼠没有发现任何肝脏毒性。为探究其中的原因，本次试验在大鼠原代肝细胞水平上研究了TB2和ZGY对TA3引起的肝细胞毒性的保护作用。<br>　　方法：绞股蓝皂苷药代动力学试验中首先建立LC--MS/MS分析方法。选择甲苯磺丁脲作为内标；样品处理方法选用甲醇沉淀蛋白法；色谱柱型号选择Waters公司的SunFire?C18柱（50?×?2.1?mm,?i.d.,?3.5?μm）；柱温40℃；流动相是乙腈和水，流动相中加入0.1%的甲酸可以提高灵敏度；梯度洗脱方式可以明显缩短分析时间到10分钟内；流速是0.2mL/min；进样量是10?L；进样前后洗针液是100μL甲醇/水溶液（1:1,v/v）；质谱选择多重反映监测（MRM）方式进行阳离子扫描；m/z441.4→109.2（绞股蓝皂苷?LVI,?绞股蓝皂苷?XLVI,?绞股蓝皂苷元）,?m/z?493.4?→?143.1(M1,M2),?m/z?271.5?→?154.7(甲苯磺丁脲)?离子对作为检测离子；根据美国食品药品监督管理局的要求，对选择性，线性范围，精密度和准确度，定量下线，基质效应，回收率和稳定性等方面进行方法学确证。最后将此方法应用在大鼠和小鼠体内药物代谢研究中。<br>　　TB2和SSG对TA3引起的大鼠肝毒性保护作用研究首先采用ROS检测方法，ROS是线粒体呼吸链在电子传递过程中产生的一组有害分子，是介导线粒体损伤和细胞凋亡的信号分子。检测完ROS水平后，采用WST--1细胞活力和ATP方法对线粒体损伤进行验证。<br>　　结果和意义：绞股蓝皂苷药代动力学试验中经过全面的方法学确证后，此LC--MS/MS方法被证明是快速,灵敏可重复的，适合绞股蓝皂苷?LVI、绞股蓝皂苷?XLVI、绞股蓝皂苷元2α--OH--PPD、M1和M2的生物高通量样品同时定量检测。其中绞股蓝皂苷?LVI、绞股蓝皂苷?XLVI和绞股蓝皂苷元2α--OH--PPD的线性范围是10.0到2000?ng/mL,M1和M2的线性范围为2.00到2000?ng/mL。精密度和准确度均符合生物样品分析要求。不存在基质效应和不稳定等情况。三组大鼠分别进行一次性口服灌胃给药136mg/kg绞股蓝总皂苷或50?mg/kg?绞股蓝皂苷元2α--OH--PPD或50?mg/kg?M2，并根据计算结果绘制药时曲线，计算药代动力学参数。最终此方法成功应用于药物在大鼠体内的药代动力学研究中。本实验中建立的LC--MS/MS分析方法以及浓度数据和药代动力学参数可以应用在后续的药效学和毒理学评价中。在后续的药物制剂学的研究中，此分析方法和研究结果可作为研究生物等效性的重要依据。同时可以用于指导临床用药，应用性极强，研究意义重大。<br>　　知母皂苷B2和知母皂苷元对知母皂苷A3引起的大鼠肝毒性保护作用实验结果显示,和TA3给药组相比，TA3+TB2?给药组和TA3+ZGY?给药组能够明显降低氧化物ROS的水平，细胞活力显著增加，ATP的含量也得到恢复。结果表明TB2和ZGY可能对TA3引起的大鼠肝细胞毒性起到保护作用,所以即使产生了有毒代谢产物TA3，也没有观察到毒性反应。此研究不仅阐明了药物与代谢产物之间的存在的相互作用关系，为进一步说明药物的安全性提供了基础。