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摘要萱藻种质中的细菌不仅影响种质保存过程中的安全性，而且对萱藻遗传学、生理学、分子生物学、生态学、病毒学等方面的研究带来困扰。本实验首次成功获得了无菌萱藻种质，并对无菌种质与带菌种质之间在生长、孢子囊形成和叶状体发育方面的差异以及维生素、植物激素对无菌萱藻种质生长的影响进行了研究。<br>　　本研究通过细菌的药物敏感性试验和萱藻的药物耐受力试验确定了适用于萱藻种质无菌化处理过程的抗生素种类和浓度。通过组织研磨仪（50Hz，59s）的震荡破碎过程获得5至10个细胞的萱藻丝状体片段。将所得萱藻种质经过灭菌海水冲洗并分为两份，以抗生素混合液分别将种质片段密度调节至25ind/mL和250ind/mL，取20个灭菌的1.5mL离心管，分为两组（Ⅰ和Ⅱ组），向Ⅰ组每个离心管中加入0.2mL25ind/mL抗生素-萱藻种质混合液，向Ⅱ组每个离心管中加入0.2mL250ind/mL抗生素-萱藻种质混合液。经过7天的黑暗条件下抗生素处理，将Ⅰ组和Ⅱ组萱藻-抗生素混合液分别移入200mLF1培养液中和Zobell2216E琼脂平板上，在黑暗条件下静置12h，之后转移到光照条件下培养。待Zobell2216E琼脂平板上藻落可见时挑取，并移入200mLF1培养液中。以固体琼脂平板（2216E，PDA，YPD），液体培养基（F1+20mg/L葡萄糖+15mg/L蛋白胨）及DAPI荧光染色观察三种方式检测所得萱藻种质中是否达到无菌状态。<br>　　以上述实验所得无菌萱藻种质和无菌化处理之前的萱藻种质为材料，对二者的生长、孢子囊形成、叶状体早期发育等过程进行了比较研究。此外，还对维生素B1、维生素H、维生素B12、吲哚乙酸（IAA）和6-苄基氨基嘌呤（6-BA）对无菌萱藻种质生长的影响进行了研究。<br>　　本文研究成果如下：<br>　　1、头孢噻肟钠800μg/mL，红霉素200μg/mL，亚胺培南200μg/mL，乙酰磺胺1600μg/mL和制霉菌素16μg/mL的抗生素混合液适于无菌萱藻种质的抗生素处理过程，既能保证除菌效果，又能保证萱藻种质细胞的存活率。<br>　　2、按照Ⅰ组的处理方法，10个样品中有3个达到无菌状态；按照Ⅱ组的处理方法，10个样品中，有9个达到无菌状态。Ⅱ组的处理方法成功率更高，然而由于萱藻种质在固体培养基上生长缓慢，Ⅱ组需要消耗更多时间才能获得无菌萱藻种质。<br>　　3、无菌萱藻种质的丝状体直径为(10.63±1.64)μm，带菌萱藻种质的丝状体直径为(8.30±0.58)μm，二者差异显著（Plt;0.05）。显微观察还发现无菌萱藻种质的培养液中会出现透明胶状物质及死亡的萱藻种质，而在带菌萱藻种质中这些物质均被细菌附着包裹。带菌萱藻种质细胞色素体的颜色比无菌萱藻种质深。<br>　　4、无菌萱藻种质与带菌种质相比，日均增长率差异不显著；无菌种质中丝状体比例显著高于带菌种质，在第21天时，无菌萱藻种质的丝状体比例达到(94.10±2.15)%，显著大于带菌萱藻种质(67.13±1.96)%的丝状体比例。<br>　　5、孢子囊诱导的结果显示，无菌种质的孢子囊比例与直径均显著高于带菌萱藻种质。萱藻叶状体形成的研究显示，相同实验条件下，带菌萱藻种质片段中叶状体比例远高于无菌萱藻种质。至第24天，接种带菌萱藻种质的培养孔中叶状体比例为(52.43±3.30)%，显著大于接种无菌萱藻种质的培养孔中叶状体比例(0.81±007)%。无菌萱藻种质成功附着于培养孔底部的比例为(39.20±2.88)%，显著低于带菌萱藻种质(56.00±1.39)%。<br>　　6、维生素B1（100μg/L）和维生素B12（0.5μg/L）对无菌萱藻种质的生长具有显著影响，在缺乏维生素B1的培养液和缺乏维生素B12的培养液中，无菌萱藻种质的日均增长率显著低于含有三种维生素的培养液中的无菌萱藻种质。维生素H（0.5μg/L）对无菌萱藻种质的生长影响不显著。IAA（10μg/L）和6-BA（4mg/L）对于萱藻种质的生长具有显著的促进作用，在研究开始的第三天，加入IAA（10μg/L）和6-BA（4mg/L）的培养液中的萱藻，其日均增长率分别比对照组高56.70%和42.98%。显微观察发现，IAA（10μg/L）和6-BA（4mg/L）对无菌萱藻种质的形态影响明显。