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组蛋白在链状亚历山大藻生长调控中的作用

摘要由组蛋白构成的染色质核小体结构是真核生物细胞核的基本特征,组蛋白在所有真核生物中参与DNA包装,并在基因表达调控中起关键作用,而甲藻是一个例外。甲藻拥有许多不寻常的细胞核特征;其DNA并不包装成核小体结构,并且染色体在整个细胞周期中保持永久性凝聚。目前一些基因组和转录组分析已经在甲藻中检测到大量的组蛋白和组蛋白修饰基因。然而,除了在Lingulodinium和Hematodinium中分别检测到组蛋白H4和H2A的蛋白表达外,迄今还没有研究报道检测到其他甲藻组蛋白的表达。也由于组蛋白量往往低于可检测水平,在蛋白质水平上组蛋白的表达很难在甲藻中检测到,但组蛋白很可能具有重要的功能。<br>  链状亚历山大藻是产生麻痹性贝类毒的主要有害藻类物种之一。基于链状亚历山大藻的转录组序列数据,编码组蛋白及其变体的基因表现出多样性。在本研究中,我们在DNA和mRNA水平上确认了不同类型的组蛋白基因;使用荧光定量PCR技术分析了经流式细胞仪确定的不同细胞周期内组蛋白基因的表达;分析了其在不同的培养条件下的基因表达;通过商用抗人核心组蛋白抗体以及质谱(MS)分析测定了组蛋白在蛋白质水平上的表达;在尝试使用人源抗体在蛋白质水平确定组蛋白表达未成功之后,对链状亚历山大藻H2B和H4的组蛋白通过合成多肽制备了抗体,并且在不同的营养条件下(高锰,高氮和高磷)进行了组蛋白表达分析。<br>  组蛋白序列分析表明链状亚历山大藻组蛋白基因与其它真核生物有较大的差异,但在构成八聚体(球型结构)区域保守;该物种不仅含有甲藻特异性组蛋白,还含有常规类型的组蛋白;对H3和H4的序列分析表明相比H2A和H2B,它们在末端具有更加保守的翻译后修饰位点。在细胞循环和富含磷的培养体系中观察到组蛋白基因转录水平没有显著变化,然而,富含氮的培养物中9个组蛋白基因中的8个显示上调。而核心组蛋白基因的表达在营养胁迫培养条件下(低磷和低氮)显著增加,这与组蛋白在胁迫状态下的转录调控/抑制作用一致。由于序列差异,商售抗体未能检测到链状亚历山大藻组蛋白H4在蛋白质水平上的表达,而人组蛋白H3抗体与低分子量蛋白(~11kDa)存在亲和反应,推测可能为甲藻特异性组蛋白H3(预测分子量11kDa)。我们使用组蛋白特异性抗体(H2B和H4)成功地检测到了蛋白质水平上的组蛋白的表达。据我们所知,这是第一个成功地采用免疫学技术检测到甲藻该类组蛋白的报告。此外,发现组蛋白的量低于当前质谱检测水平,通过质谱确定类组蛋白并不是组蛋白,而是高度表达的酸溶蛋白。组蛋白在细胞循环过程中表达量未发生改变表明,A.pacificum中的组蛋白基因属于不依赖于复制的类别,提示其在DNA包装中的作用有限。高氮和高磷培养条件下,组蛋白H4蛋白表达显著增加,表明了H4在有害藻华中的转录刺激作用,这种观点也得到了多种组蛋白修饰酶和组蛋白密码子保守性的支持。同时研究发现,低表达的组蛋白可以用甲藻特异性抗体识别而人源组蛋白抗体无法检测链状亚历山大藻中组蛋白蛋白质水平表达。虽然组蛋白不是主要存在于A.pacificum中的核蛋白,但组蛋白的功能意义不可低估,而且需要进一步研究它们在甲藻生物学中的重要性。

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