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摘要急性肝损伤（acute liver injury，ALI）通常是由肝炎病毒、药物过量和化学毒素引起。持续的肝损伤最终可导致肝功能障碍甚至死亡，对人体具有严重危害。四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4)是一种常见的化学毒素，其诱导的急性肝损伤模型是模拟人类肝脏疾病的经典模型之一。CCl4被肝脏吸收后，对肝细胞的细胞膜结构与功能造成损害。周期素依赖性激酶5激活结合蛋白3（cyclin dependent kinase5regulatory subunit associated protein3，CDK5RAP3）是UFM1系统的一种底物适配器，在物种间高度保守，哺乳动物各个器官中均有表达，其中肝脏中表达量最高；CDK5RAP3通过控制肝细胞增殖和分化、糖脂代谢、ufmylation和内质网（ER）稳态，在哺乳动物肝脏发育和肝功能中发挥关键作用。本研究通过对小鼠腹腔注射15%的CCl4油溶液获得经典的急性肝损伤模型，对照组给与同体积的橄榄油溶液。所有小鼠在注射CCl424h后，收集血清，测定五项血清肝功能指标。接着取各组小鼠的同一部位肝脏，并对其进行固定包埋切片，用于苏木精-伊红（Hamp;E）染色和TUNEL染色。剩余部分肝脏加入Trizol RNA提取试剂或RIPA蛋白裂解液提取总RNA和总蛋白，用于qRT-PCR分析实验和蛋白免疫印迹实验。<br>　　血清肝功能指标的检测结果与苏木精-伊红（Hamp;E）染色结果证实CCl4急性肝损伤小鼠模型构建成功，且存在性别差异，雄性小鼠受到的肝损伤比雌性小鼠更严重。qRT-PCR和Western blotting实验结果表明，小鼠肝脏中CDK5RAP3的表达因CCl4急性肝损伤的发生而遭到抑制，且在CCl4急性肝损伤模型组不同性别小鼠中的表达存在差异，雄性小鼠的CDK5RAP3的表达水平显著低于雌性小鼠。进一步的分子实验结果表明，与对照组相比，内质网应激相关基因Grp78(glucose regulated protein78kD)、ATF4(activating transcription factor4)、ATF6(activating transcription factor6)、Erdj4(dnaJ heat shock protein family(Hsp40)member B9)及促炎细胞因子IL-1β(interleukin1beta)、TNF-α(tumor necrosis factor)在CCl4急性肝损伤模型组小鼠体内高表达且存在性别差异，模型组雄性小鼠的内质网应激相关基因和促炎细胞因子的表达水平显著高于雌性小鼠，即给药CCl4后，小鼠体内发生了内质网应激反应并伴有炎症反应，雄性小鼠应对内质网应激的能力不如雌性小鼠，且雄性小鼠的炎症反应程度比雌性小鼠严重。TUNEL实验在组织学上检测DNA碎片，这是凋亡诱导细胞死亡的典型特征。实验结果经过图像分析软件Image J分析后表明，给药CCl4后，小鼠的肝细胞发生凋亡，不同性别小鼠的肝细胞凋亡率存在差异，雄性小鼠的肝细胞凋亡率显著高于雌性小鼠。qRT-PCR及Western blotting检测小鼠肝脏中Chop(C/EBP homologous protein)和Bax(Bcl-2-associated X protein)的表达水平支持了这一结果。<br>　　综上所述，本研究在成功构建CCl4急性肝损伤小鼠模型的基础上，通过生化分析、病理组织学分析证明了CCl4诱导的急性肝损伤存在性别差异；进一步的分子实验表明，CDK5RAP3在不同性别小鼠CCl4急性肝损伤中的表达差异可能影响不同性别小鼠肝脏中内质网应激反应、炎症反应及肝细胞凋亡程度，而CDK5RAP3在不同性别小鼠CCl4急性肝损伤中的差异性表达是否与CCl4急性肝损伤性别差异相关仍需进一步的研究论证。