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CLIC1通过调节AMOT-p130表达促进胃癌侵袭迁移的作用机制研究

摘要第一部分CLIC1和AMOT-p130在胃癌中的表达及其相关性<br>  目的:探究细胞内氯离子通道蛋白1(ChlorideIntracellularChannel1,CLIC1)和血管生成抑制素结合蛋白p130亚型(Angiomotin,AMOT-p130)在胃癌中的表达及其调控关系。<br>  方法:采用免疫组织化学方法检测CLIC1和AMOT-p130在胃癌组织及癌旁组织中的表达,采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光和蛋白质免疫印迹技术(Westernblot)分析敲除和过表达CLIC1后胃癌细胞AMOT-p130的表达变化。<br>  结果:1.CLIC1的表达主要在胃癌组织的胞质和胞核中,而AMOT-p130的表达主要在癌旁组织的胞质中。CLIC1在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05),而AMOT-p130在胃癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。2.CLIC1的表达与性别、年龄、浸润深度、肿瘤分化、淋巴转移、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05);与血管浸润、TNM病理分期具有相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。AMOT-p130的表达与性别、年龄、肿瘤分化、淋巴转移、肿瘤大小无明显相关性(Pgt;0.05);与浸润深度、TNM病理分期具有相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.CLIC1和AMOT-p130在胃癌组织中的表达具有相关性(P<0.05)。4.qRT-PCR实验中,AMOT-p130的mRNA表达水平在敲除CLIC1的胃癌细胞株(MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO)中显著升高(P<0.05),而在过表达CLIC1(MGC-803OE-CLIC1、AGSOE-CLIC1)后则显著降低(P<0.05)。5.Westernblot实验表明,AMOT-p130的蛋白表达水平在敲除CLIC1的胃癌细胞株(MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO)中显著升高(P<0.05),而在过表达CLIC1(MGC-803OE-CLIC1、AGSOE-CLIC1)后则显著降低(P<0.05)。6.免疫荧光实验表明,AMOT-p130的表达水平在敲除CLIC1的胃癌细胞株(MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO)中显著升高。<br>  结论:CLIC1在胃癌组织中的表达水平升高,且与血管浸润、TNM病理分期相关;AMOT-p130在胃癌组织中的表达水平降低,且与肿瘤浸润深度、TNM病理分期相关。CLIC1和AMOT-p130在胃癌组织中的表达具有相关性。在胃癌细胞中CLIC1可以负向调控AMOT-p130的表达。<br>  第二部分CLIC1介导AMOT-p130对胃癌细胞生物学行为的影响<br>  目的:体外实验探究CLIC1介导AMOT-p130对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。<br>  方法:使用敲除CLIC1的胃癌细胞株(MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO)构建沉默和过表达AMOT-p130的慢病毒稳转细胞株用于后续实验。胃癌细胞的迁移和侵袭能力使用Transwell小室和划痕实验验证,胃癌细胞的增殖能力使用CCK8、EDU实验验证。<br>  结果:1.与对照组相比,敲除CLIC1的胃癌细胞株(MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO)侵袭、迁移能力减弱(P<0.05),增殖能力减弱(P<0.05)。2.与对照组相比,在敲除CLIC1的胃癌细胞株MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO沉默AMOT-p130后,胃癌细胞的侵袭、迁移能力增强(P<0.05),增殖能力增强(P<0.05);而过表达AMOT-p130后,胃癌细胞的侵袭、迁移能力减弱(P<0.05),增殖能力减弱(P<0.05)。<br>  结论:CLIC1在体外通过调节AMOT-p130的表达促进胃癌细胞的侵袭、迁移和增殖。<br>  第三部分CLIC1介导AMOT-p130影响胃癌细胞生物学行为的机制研究<br>  目的:探讨CLIC1介导AMOT-p130影响胃癌细胞生物学行为的相关机制。<br>  方法:使用Westernblot检测各处理组(KD-NC,KD,OE-NC,OE)中AMOT-p130、E-cadherin、Snail、Vimentin的变化。<br>  结果:1.与对照组相比,敲除CLIC1的胃癌细胞株MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO沉默AMOT-p130后,E-cadherin的表达下调(P<0.05),而Vimentin和Snail的表达上调(P<0.05)。2.敲除CLIC1的胃癌细胞株MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO过表达AMOT-p130后,E-cadherin的表达上调(P<0.05),而Vimentin和Snail的表达下调(P<0.05)。<br>  结论:CLIC1可介导AMOT-p130调控胃癌细胞的上皮间质转化。

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导师 陈俊强
分类号 R735.2
发布时间 2022-04-20
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