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摘要目的：<br>　　1.建立蓝光诱导小鼠视网膜光损伤模型，检测Grx2在视网膜组织中的表达情况；<br>　　2.探讨Grx2在蓝光诱导小鼠视网膜光损伤中的作用；<br>　　3.建立蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞光损伤模型，探讨Grx2在蓝光诱导的ARPE-19细胞损伤中的作用及机制。<br>　　方法：<br>　　1.采用强度为2000Lux的蓝光设备对C57BL/6J小鼠进行蓝光光照，连续光照3天，每天5小时建立小鼠视网膜光损伤模型。采用ERG检测小鼠视网膜功能，HE染色观察小鼠视网膜组织结构损伤情况，real-timePCR和Westernblotting检测小鼠视网膜组织中Grx2的mRNA和蛋白表达水平。<br>　　2.采用琼脂糖凝胶电泳鉴定Grx2基因敲除和敲入小鼠的基因型，Westernblotting检测转基因小鼠视网膜中Grx2蛋白表达情况。蓝光造模后，采用Westernblotting检测小鼠视网膜凋亡相关因子和JNK信号通路的蛋白水平。<br>　　3.以1500Lux的蓝光对ARPE-19细胞光照0h、6h、12h、24h和48h等不同时间。采用CCK-8检测不同光照时间后ARPE-19的细胞活力，LDH释放实验检测细胞毒性，活性氧检测试剂盒检测细胞内总ROS，mitoSOX?检测线粒体ROS,使用real-timePCR检测ARPE-19细胞光照后Grx2mRNA表达水平，Westernblotting检测光照后Grx2和凋亡相关蛋白表达水平。<br>　　4.慢病毒感染ARPE-19细胞，建立Grx2过表达和低表达模型，并分为CN组、CN+BL组、siGrx2+BL组、siNC+BL组、oeGrx2+BL组和oeNC+BL组，以24h为蓝光光照时间，对光照组进行蓝光光照。利用CCK-8检测蓝光诱导后ARPE-19的细胞活力，LDH释放实验检测细胞毒性，细胞凋亡检测法（Annexin-VFITC/PropidiumIodide）检测细胞凋亡率，mitoSOX?检测线粒体ROS，Mito-TrackerRed检测线粒体膜电位。将正常ARPE-19细胞和慢病毒感染细胞分为CN+BL组、siGrx2+BL组、siGrx2+SP+BL组、oeGrx2+BL组和oeGrx2+Ani+BL组，使用Westernblotting检测光照后凋亡相关蛋白表达水平和JNK信号通路的蛋白水平。<br>　　结果：<br>　　1.ERG结果显示C57BL/6J小鼠经2000Lux蓝光光照后暗适应的a波、b波以及明适应的b波振幅均明显降低，小鼠视网膜功能受损。HE结果显示视网膜外核层厚度明显变薄。小鼠视网膜组织中Grx2mRNA和蛋白水平显著升高。<br>　　2.琼脂糖凝胶电泳成功鉴定Grx2基因敲除和基因敲入小鼠基因型。ERG结果显示Grx2KO小鼠光照后暗适应a波、b波及明适应的b波振幅显著降低，而Grx2KI小鼠光照后暗适应a波、b波及明适应的b波振幅未见明显降低。HE结果显示Grx2KO小鼠蓝光光照后视网膜外核层厚度明显变薄，Grx2KI小鼠光照后视网膜外核层厚度无显著改变。Westernblotting结果显示光照后Bax、CleavedCaspase3、CleavedCaspase9、Cytochromec和p-JNK蛋白水平显著增加，Bcl2蛋白显著降低。Grx2敲除后，相应蛋白的改变更加明显，而Grx2敲入后Bax、CleavedCaspase3、CleavedCaspase9、Cytochromec和p-JNK蛋白水平显著降低，Bcl2蛋白水平显著升高。<br>　　3.蓝光光照ARPE-19细胞后，随着蓝光光照时间延长，ARPE-19细胞活力降低，细胞毒性和细胞凋亡显著增加。此外，蓝光可以刺激细胞内总ROS和MtROS显著增加，氧化应激加重，并呈一定时间依赖性。蓝光照射后Grx2mRNA和蛋白表达显著增加。Grx2mRNA表达在蓝光光照12h达高峰，而在蓝光光照24h的Grx2蛋白表达水平较12h时更高。光照后Bax、CleavedCaspase3和CleavedCaspase9蛋白表达呈时间依赖性增加，而Bcl-2呈时间依赖性降低。<br>　　4.Grx2过表达能缓解蓝光诱导的ARPE-19细胞内的氧化应激反应，提高细胞活力，降低LDH释放量，减轻细胞毒性，提高线粒体膜电位，降低细胞凋亡率。此外，与CN+BL组相比，CN+SP+BL组p-JNK蛋白水平明显下降，而CN+Ani+BL组p-JNK蛋白水平显著增加。siGrx2+SP+BL组细胞p-JNK水平较siGrx2+BL组明显降低；oeGrx2+Ani+BL组细胞p-JNK水平较oeGrx2+BL组明显升高。另外，siGrx2+SP+BL组细胞Bax、CleavedCaspase3、CleavedCaspase9和Cytochromec蛋白水平较siGrx2+BL组明显降低，Bcl-2蛋白表达明显增高；而oeGrx2+Ani+BL组细胞Bax、CleavedCaspase3、CleavedCaspase9和Cytochromec蛋白水平较oeGrx2+BL组明显升高，Bcl-2蛋白表达明显下降。<br>　　结论：<br>　　1.蓝光光照后小鼠视网膜结构和功能明显受损，且可增加小鼠视网膜Grx2的表达。<br>　　2.Grx2敲除会加重蓝光对小鼠视网膜结构和功能的损伤，激活JNK信号通路，促进细胞凋亡；而Grx2敲入会减轻蓝光对小鼠视网膜结构和功能的损伤，下调JNK信号通路，抑制细胞凋亡。<br>　　3.蓝光可致ARPE-19细胞呈时间依赖性损伤。随着光照时间延长，细胞毒性加重，细胞活力降低，且细胞内总ROS和线粒体ROS增加，氧化应激加重，继而引起细胞凋亡。<br>　　4.低表达Grx2显著降低蓝光诱导的ARPE-19细胞活力，加重细胞凋亡，而过表达Grx2可改善蓝光对ARPE-19细胞的损伤，增加细胞活力，抑制细胞凋亡。Grx2在蓝光诱导的ARPE-19细胞损伤中发挥一定保护作用，而这种保护作用可能是通过抑制JNK信号通路的活化实现。