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摘要第一部分GIPC1在颞叶癫痫患者及癫痫动物模型中的表达和定位研究<br>　　目的：探讨GIPC1在颞叶癫痫（temporallobeepilepsy,TLE）患者及癫痫小鼠模型中的表达和定位。<br>　　方法：<br>　　1.人脑标本收集：收集创伤性脑损伤（traumaticbraininjury,TBI）患者手术切下的颞叶皮层作为对照组（Con组），收集难治性颞叶癫痫患者手术切下的颞叶皮层作为癫痫组（TLE组）。<br>　　2.癫痫动物模型构建：以海马内注射海人酸（kainicacid,KA）且根据Racine评分达到癫痫诊断标准的小鼠作为癫痫组（Epi组），对照组（Con组）海马内注射同等体积的生理盐水。<br>　　3.使用免疫印迹方法来检测GIPC1在难治性颞叶癫痫患者及癫痫小鼠模型中的表达情况。<br>　　4.使用免疫荧光双标方法来检测GIPC1在难治性颞叶癫痫患者及癫痫小鼠模型中的定位情况。<br>　　结果：<br>　　1.在人脑组织中，与对照组相比，GIPC1在癫痫组的表达水平下降。在小鼠脑组织中，无论是在小鼠海马还是在颞叶皮层中，与对照组相比，GIPC1在癫痫组的表达水平均明显下降。<br>　　2.在人脑组织和小鼠海马及颞叶皮层中，免疫荧光结果均提示GIPC1与神经元标记物NeuN共表达，而未见其与星形胶质细胞标记物GFAP共表达，且GIPC1主要分布于神经元的胞质中。<br>　　结论：GIPC1在颞叶癫痫患者及癫痫小鼠脑组织中均表达下降，提示其可能参与了癫痫的发生过程。GIPC1主要表达于神经元胞质中，而未见其在星形胶质细胞中表达，提示GIPC1可能主要通过神经元而非星形胶质细胞发挥作用。<br>　　第二部分GIPC1在癫痫发生中的作用研究<br>　　目的：探讨GIPC1在癫痫发生中的作用。<br>　　方法：<br>　　1.实验分组：将健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分为三个组，分别为对照组（Con组）、空病毒组（Con-GIPC1组）和过表达组（GIPC1组）。空病毒组海马内注射空病毒载体，过表达组海马内注射带有GIPC1表达序列的病毒载体，对照组海马内注射等体积的生理盐水。3周后各组小鼠均接受海马内KA注射，重新命名为癫痫组（KA组）、空病毒组（Con-GIPC1+KA组）和过表达组（GIPC1+KA组）。<br>　　2.病毒效率验证：病毒注射后3周，使用免疫荧光方法和免疫印迹方法分别对对照组（Con组）、空病毒组（Con-GIPC1组）和过表达组（GIPC1组）三组进行病毒效率验证。<br>　　3.KA注射后，运用行为学监测和海马局部场电位（localfieldpotential,LFP）方法分别对癫痫组（KA组）、空病毒组（Con-GIPC1+KA组）和过表达组（GIPC1+KA组）三组小鼠进行癫痫易感性和神经元异常放电检测。<br>　　结果：<br>　　1.免疫荧光结果显示，病毒成功注射进海马CA1区，且广泛分布于整个海马组织中。<br>　　2.免疫印迹结果显示，与对照组（Con组）和空病毒组（Con-GIPC组）比较，过表达组（GIPC1组）中的GIPC1表达量显著升高，而对照组（Con组）和空病毒组（Con-GIPC1组）两组中的GIPC1表达量无明显差异。<br>　　3.行为学监测结果提示，与癫痫组（KA组）和空病毒组（Con-GIPC1+KA组）比较，过表达组（GIPC1+KA组）的潜伏期明显延长，癫痫自发性反复发作（spontaneousrecurrentseizure,SRS）次数明显减少以及惊厥严重程度明显减轻，而癫痫组（KA组）和空病毒组（Con-GIPC1+KA组）两组在这三方面无明显差异。<br>　　4.海马LFP结果表明，与癫痫组（KA组）和空病毒组（Con-GIPC1+KA组）比较，过表达组（GIPC1+KA组）的惊厥样事件（seizures-likeevent,SLE）的次数和时间均减少，而癫痫组（KA组）和空病毒组（Con-GIPC1+KA组）两组在这两方面无明显差异。<br>　　结论：过表达GIPC1后降低了KA小鼠的癫痫易感性,且改善了癫痫小鼠异常神经元放电情况，提示GIPC1确实参与了癫痫的发生过程。<br>　　第三部分GIPC1在癫痫发生中的可能作用机制研究<br>　　目的：探讨GIPC1在癫痫发生中的可能作用机制。<br>　　方法：<br>　　1.运用免疫印迹方法检测mGluR7在癫痫动物模型中的表达情况。<br>　　2.运用免疫荧光双标方法检测GIPC1与mGluR7之间的共定位情况。<br>　　3.运用免疫印迹方法检测病毒注射7周后GIPC1、总的mGluR7及细胞膜上的mGluR7的表达情况。<br>　　结果：<br>　　1.与对照组相比，mGluR7在癫痫小鼠海马及颞叶皮层中的表达均下降。<br>　　2.免疫荧光结果提示，GIPC1与mGluR7之间存在共定位。<br>　　3.病毒注射7周后，与癫痫组（KA组）和空病毒组（Con-GIPC1+KA组）比较，过表达组（GIPC1+KA组）的GIPC1、总的mGluR7及细胞膜上的mGluR7的表达量均显著升高，而癫痫组（KA组）和空病毒组（Con-GIPC1+KA组）两组在这三方面均无明显差异。<br>　　结论：GIPC1与mGluR7之间的共定位提示两者之间可能存在相互作用。伴随GIPC1的过表达，mGluR7的表达量也随之升高，提示GIPC1可能通过增加mGluR7的表达量来调控癫痫活动。