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摘要目的：<br>　　心血管疾病（CVD）是威胁全人类生命健康的重要因素之一，动脉粥样硬化（AS）是其主要病理生理学基础。内皮细胞损伤作为AS形成的始动环节，通过诱导血管慢性炎症反应促进CVD发生发展。金雀异黄素（GEN）具有抗AS效应，但作用机制尚未完全阐明。本研究旨在探究GEN对脂多糖（LPS）诱导的小鼠血管慢性炎症反应的影响及是否与调控miR-21表达有关。<br>　　方法：<br>　　1.高脂饮食喂养C57BL/6小鼠联合腹腔注射LPS（2mg/kg，3次/w）构建小鼠血管慢性炎症反应模型。小鼠随机分为对照组、LPS模型组、PDTC组（10mg/kg，1次/d）、GEN低剂量组（5mg/kg，1次/d）、GEN中剂量组（10mg/kg，1次/d）和GEN高剂量组（20mg/kg，1次/d）。20周后，RT-qPCR检测主动脉或外周血单个核细胞（PBMC）中TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2、NF-κBp65mRNA及miR-21表达，WesternBlot和IHC分析主动脉COX-2、iNOS、NF-κBp65蛋白水平，IF分析主动脉NF-κBp65蛋白表达。<br>　　2.高脂饮食喂养C57BL/6小鼠联合腹腔注射LPS（2mg/kg，3次/w）、胃灌注GEN（10mg/kg，1次/d）16周后，尾静脉注射miR-21拮抗剂（25mg/kg，1次/3d）。拮抗剂注射4周后，RT-qPCR检测主动脉或PBMC中iNOS、COX-2、NF-κBp65mRNA及miR-21表达，WesternBlot和IHC分析主动脉COX-2、iNOS、NF-κBp65蛋白水平，IF分析NF-κBp65蛋白表达。<br>　　3.LPS（0.25、0.5、1.0μg/mL）处理HUVE-12细胞24h。RT-qPCR检测TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κBp65mRNA表达，WesternBlot分析COX-2、iNOS、NF-κBp65蛋白水平，构建LPS诱导血管内皮细胞炎症损伤模型。随后，使用不同浓度GEN（2.5、5.0、10、20μM）孵育HUVE-12细胞24h或GEN（10μM）处理HUVEC-12细胞2h再与LPS（1.0μg/mL）共处理24h。CCK8检测细胞活力，RT-qPCR检测TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κBp65mRNA和miR-21表达，WesternBlot分析COX-2、iNOS、NF-κBp65蛋白水平。<br>　　使用慢病毒构建miR-21稳定过表达或敲降HUVE-12细胞系，荧光显微镜下观察GFP蛋白表达，RT-qPCR分析miR-21水平。然后，GEN（10μM）预处理miR-21稳定过表达或敲降细胞系2h，再与LPS共处理24h。RT-qPCR检测COX-2、iNOS、NF-κBp65mRNA表达，WesternBlot检测COX-2、iNOS、NF-κBp65、NF-κBp-p65Ser276、AKT、p-AKTSer473蛋白水平，IF分析NF-κBp65蛋白表达。使用GEN（10μM）、IGF-1（100ng/mL）预处理miR-21稳定敲降细胞系2h，再与LPS共处理24h。RT-qPCR检测COX-2、iNOS、NF-κBp65mRNA水平，WesternBlot检测COX-2、iNOS、NF-κBp65、NF-κBp-p65Ser276蛋白水平，IF分析NF-κBp65蛋白表达。<br>　　结果：1.小鼠体重缓慢增长；LPS明显上调主动脉TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2、NF-κBp65mRNA和蛋白表达，小鼠血管慢性炎症反应模型构建成功。此外，LPS明显促进主动脉和PBMC中miR-21表达，而GEN呈浓度依赖性下调小鼠主动脉炎症相关因子及主动脉和PBMC中miR-21表达，抑制小鼠血管慢性炎症反应。<br>　　2.miR-21拮抗剂明显下调小鼠主动脉及PBMC中miR-21表达，并协同GEN抑制COX-2、iNOS、NF-κBp65mRNA和蛋白表达。3.1.0μg/mLLPS明显上调HUVE-12细胞TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κBp65mRNA和蛋白表达，可用于构建血管内皮细胞炎症损伤模型。此外，GEN不影响血管内皮细胞活力，能抑制LPS诱导的TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κBp65及miR-21表达。<br>　　与空载体组比较，miR-21OE组细胞miR-21表达显著上调，miR-21KD组细胞miR-21表达明显下调。此外，miR-21过表达促进LPS上调COX-2、iNOS、NF-κBp65、NF-κBp-p65Ser276、p-AKTSer473表达及NF-κBp65核转位，有效拮抗GEN对炎症相关因子的抑制作用，而miR-21敲降作用与之相反。<br>　　与miR-21NC+LPS+GEN组比较，IGF-1明显上调COX-2、iNOS、NF-κBp65、NF-κBp-p65Ser276mRNA或蛋白表达，并促进NF-κBp65核转位，而敲降miR-21明显减轻IGF-1对GEN的抑制作用。<br>　　结论：<br>　　GEN通过下调miR-21表达，降低AKT磷酸化水平，抑制LPS诱导的小鼠血管慢性炎症反应。