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摘要目的：通过探讨人细小病毒B19非结构蛋白NS1转染人慢性髓性白血病细胞K652后GATA1、GATA2表达的变化，及引起GATA1、GATA2表达变化的分子调控机制来证实人细小病毒B19NS1有可能参与了Notch-Hes信号通路激活，或直接进入宿主细胞核内负性调控GATA1、GATA2相关核转录，从而抑制红细胞的分化与成熟，探索出NS1蛋白在抑制红系祖细胞分化和成熟中一种重要的基于NS1-Hes-GATA新的调控机制。<br>　　方法：通过人工构建人细小病毒B19NS1重组表达质粒pNS1-HA，并转染人慢性髓性白血病细胞K652，建立瞬时表达模型作为重组质粒组，同时建立空载质粒对照组、空白细胞对照组，在转染后各个时段收集细胞，Real-timePCR检测各组Notch1、Hes1、Hes5、GATA1、GATA2mRNA表达的变化，Westernblot检测蛋白表达的变化；siRNA抑制Notch1,Hes1、Hes5,Westernblot检测GATA1、GATA2蛋白表达水平；免疫荧光及共聚焦显微镜观察目的蛋白在细胞内定位。<br>　　结果：1.重组质粒pNS1-HA经BamHI、XbaI双酶切后释出的插入片段，相对分子量为2031bp。空载质粒经双酶切后未见目的基因片段。转染重组质粒pNS1-HA转染的K562细胞可见目的蛋白表达，相对蛋白分子量分别为78KD。空载质粒转染的K562细胞或未进行质粒转染的K562细胞中未见目的蛋白表达。<br>　　2.与0小时相比，pNS1-HA转染K56细胞2小时后，GATA1编码基因的mRNA表达降低，转染后4小时达到最低峰，仅为0小时的0.1倍，转染后6、8、24小时呈现持续性低表达状态（Plt;0.05）。pNS1-HA转染K562细胞4小时后，GATA2编码基因的mRNA表达增高，在转染后6、8小时持续增高，24小时达到高峰，仅为0小时的8倍（Plt;0.05）。与空白细胞相比，pNS1-HA转染后2小时，GATA1蛋白表达降低，在转染后4、6、8、24小时持续降低，在转染后24小时达到最低峰，仅为空白细胞的0.1倍（Plt;0.05）。GATA2蛋白则相反，从转染后2小时开始增高，4、6、8、24小时持续增高，在转染后24小时达到最高峰，为空白细胞的2.9倍（Plt;0.05）。<br>　　3.与空白K562细胞相比，pNS1-HA质粒转染24小时后的K562细胞，Notch1基因编码的蛋白胞内段NICD、HES1蛋白、HES5蛋白表达均增高，分别为空白对照组的1.7倍、2.0倍、1.9倍（Plt;0.05）。空载质粒转染24小时后K562细胞中NICD、HES1、HES5蛋白的表达均无明显变化（Pgt;0.05）。<br>　　4.与空白细胞相比，转染si-Notch、si-Hes1、si-Hes5的K562细胞GATA1及GATA2蛋白的表达均明显增高（Plt;0.05）。<br>　　5.pNS1-HA转染经si-Notch1预处理的细胞，GATA1的表达明显较pNS1-HA转染未经si-Notch预处理的细胞增高（Plt;0.05）。与空白细胞相比，pNS1-HA转染si-Notch1预处理的细胞，GATA1的表达无明显变化（Pgt;0.05）。pNS1-HA转染经si-Hes1预处理的细胞，GATA1的表达明显较pNS1-HA转染未经si-Hes1预处理的细胞上调,且上调效果较si-Notch1、si-Hes5预处理的细胞高（Plt;0.05）6.pNS1-HA转染的K562细胞制作的滴片于荧光显微镜下，可见CY3标记的HA二抗红色荧光信号，其中大部分与DAPI标志的细胞核重叠。空白细胞对照未见CY3荧光信号。<br>　　结论：人细小病毒B19NS1重组表达质粒pNS1-HA构建成功,转染K562细胞可表达NS1-HA蛋白。pNS1-HA转染K562细胞后可下调GATA1、上调GATA2的表达。其中，pNS1-HA下调GATA1的表达是通过激活Notch1-Hes1/Hes5信号通路来进行的。K562细胞转染pNS1-HA后，NS1-HA在细胞质及细胞核中均有表达，主要在细胞核中表达。