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摘要研究目的<br>　　本文旨在检测microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）在透明细胞肾细胞癌（Clearcellrenalcellcarcinoma，ccRCC）细胞系和组织中的表达情况，探究其在ccRCC细胞中的基本生物学功能，分析miR-219a-5p与ccRCC患者临床病理参数及预后的相关性。<br>　　材料与方法<br>　　实验材料<br>　　1培养细胞系：HK-2（人肾小管正常上皮细胞系）、786-O（人肾透明细胞癌原发灶细胞系）和ACHN（人肾透明细胞癌胸水转移灶细胞系）；<br>　　2微阵列组织芯片：75例透明细胞肾细胞癌组织，包含癌组织及癌旁正常组织各1点，共150点制成的ccRCC组织芯片。<br>　　实验方法<br>　　1采用定量逆转录聚合酶链反应（Quantitativereversetranscription-polymerasechainreaction,qRT-PCR）检测miR-219a-5p在ccRCC细胞系中的表达。<br>　　2采用组织微阵列（Tissuemicroarray,TMA）原位杂交（Insituhybridization,ISH）检测miR-219a-5p在ccRCC组织中的表达。<br>　　3采用Kaplan-Meier、Cox回归分析miR-219a-5p的表达与ccRCC临床病理参数及预后的相关性。<br>　　3.1结合ccRCC患者临床及随访资料，采用Kaplan-Meier分析ccRCC组织miR-219a-5p的表达水平与ccRCC患者术后生存时间的相关性；<br>　　3.2采用Cox回归分析miR-219a-5p的表达与ccRCC患者病理参数及预后之间的相关性。<br>　　4采用细胞实验检测miR-219a-5p异常表达对ccRCC细胞生物学行为的影响。<br>　　4.1利用miR-219a-5pmimic/NC转染肾细胞癌细胞系786-O、ACHN上调miR-219a-5p后，通过qRT-PCR检测细胞转染效率；<br>　　4.2成功转染miR-219a-5p后，通过CCK-8细胞增殖实验检测肾细胞癌细胞系786-O、ACHN的增殖能力；<br>　　4.3成功转染miR-219a-5p后，采用细胞伤口愈合实验检测肾细胞癌细胞系786-O、ACHN的迁移能力；<br>　　4.4成功转染miR-219a-5p后，采用Transwell法来探究过表达miR-219a-5p对肾细胞癌细胞系786-O、ACHN的迁移及侵袭能力的影响。<br>　　研究结果<br>　　1qRT-PCR实验表明：与HK-2相比，miR-219a-5p在786-O和ACHN中明显低表达（P＜0.05）。<br>　　2ccRCC组织微阵列原位杂交实验显示：miR-219a-5p在ccRCC组织及其癌旁组织中均有表达，与癌旁组织相比，miR-219a-5p在癌组织中明显低表达：miR-219a-5p在78.08%（57/73）的ccRCC患者组织中低表达，而在癌旁组织中，仅有9.46%（7/74）的组织呈低表达（P=0.000）。<br>　　3Kaplan-Meier生存分析显示:与miR-219a-5p高表达组相比，miR-219a-5p低表达组的ccRCC患者具有更差的总体生存期(P=0.011)；<br>　　4ccRCC组织中miR-219a-5p的表达与肿瘤分化程度有相关性，miR-219a-5p在Ⅰ/Ⅱ级ccRCC患者组织中的高表达率为35.90%（14/39），而在Ⅲ/Ⅳ级ccRCC患者组织中的高表达率仅为5.88%（2/34）（P=0.002）；<br>　　5miR-219a-5p的表达与ccRCC肿瘤大小有相关性，miR-219a-5p在肿瘤直径小于或等于5cm的ccRCC患者组织中的高表达率为35%（14/40），而在肿瘤直径大于5cm的ccRCC患者组织中的高表达率仅为6.06%（2/33）（P=0.003）；<br>　　6miR-219a-5p的表达与ccRCC患者年龄、性别、有无淋巴结转移、有无脉管侵犯及肿瘤TNM分期之间则无明显相关性(P＞0.05)；<br>　　7Cox多因素分析表明ccRCC患者年龄（P=0.012）、肿瘤分级（P=0.009）以及miR-219a-5p的表达（P=0.017）可以作为与ccRCC患者预后有相关性的一个独立因素。<br>　　8体外细胞功能学实验显示：人工过表达miR-219a-5p可抑制ccRCC细胞系786-O和ACHN的增殖(48h:786-OP=0.031、ACHNP=0.043；72h:786-OP=0.022、ACHNP=0.026）、迁移（786-OP=0.002、ACHNP=0.001）及侵袭（786-OP=0.004、ACHNP=0.002）。<br>　　实验结论<br>　　1miR-219a-5p在ccRCC细胞系和组织中显著低表达。<br>　　2miR-219a-5p的表达与ccRCC肿瘤分级、肿瘤大小呈负相关，与ccRCC患者术后生存时间呈正相关。<br>　　3过表达miR-219a-5p可以抑制ccRCC细胞系786-O、ACHN的增殖、迁移及侵袭能力。<br>　　4上述研究表明miR-219a-5p有望成为ccRCC的早期诊断、预后判断及靶点治疗的潜在生物标志物。