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摘要目的：<br>　　通过细胞实验、动物实验以及血吸虫成虫体外干预实验，探究小柴胡汤及其主要成分对血吸虫致肝纤维化的作用机制，为应用小柴胡汤治疗血吸虫肝纤维化奠定理论基础，为筛选并发现用于血吸虫肝纤维化的新药提供技术支撑。<br>　　方法：<br>　　1.小柴胡汤及其主要成分对体外培养肝星状细胞的作用<br>　　体外培养人肝星状细胞系LX-2细胞，在TGF-β1刺激活化后，分别用小柴胡汤、柴胡皂苷A（SSA）、黄芩苷（BC）作用于细胞。通过MTT法和EDU法检测细胞增殖率，采用流式细胞术观察细胞凋亡情况，通过RT-PCR和Western Blot检测纤维化相关分子COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA的表达水平。<br>　　2.小柴胡汤及其主要成分干预日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用<br>　　通过人工感染，建立日本血吸虫感染小鼠肝纤维化动物模型，尾蚴感染小鼠6周后，通过灌胃，分别给予小柴胡汤、SSA、BC，干预4周后，剖杀取材；病理切片HE染色和Masson染色观察小鼠肝脏病变，分析虫卵肉芽肿面积和胶原纤维沉积量；流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞和Treg细胞数量；通过ELISA法，检测小鼠血清IL-6、IL-10、TGF-β1和TNF-α等细胞因子的表达量；采用RT-PCR和Western Blot方法，检测小鼠肝脏COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1的表达量。<br>　　3.小柴胡汤及其主要成分干预体外培养血吸虫成虫的研究<br>　　人工感染实验家兔，并于感染6周后收集肠系膜静脉丛成虫，进行体外培养，给予不同浓度小柴胡汤、SSA、BC干预，考察血吸虫成虫的存活率、活动力和产卵数量；通过RT-PCR方法，检测用药后虫体体表水通道蛋白sjAQP mRNA的表达水平，探讨药物作用于虫体体表蛋白进而影响虫体活力的机制。<br>　　结果：<br>　　1.小柴胡汤及其主要成分对体外培养肝星状细胞的作用<br>　　小柴胡汤、SSA、BC可剂量依赖性抑制LX-2细胞的增殖（P＜0.05），其半数抑制浓度分别为0.46%、2.65μg/mL、11.72μg/mL；促进活化的肝星状细胞发生凋亡（P＜0.05）；抑制活化的LX-2细胞COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA的表达（P＜0.05）。<br>　　2.小柴胡汤及其主要成分干预日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用<br>　　与血吸虫感染未用药（模型）组相比，经小柴胡汤（0.01mL/kg·d）、SSA（10mg/kg·d）、BC（250mg/kg·d）干预4周后，小鼠生存状态较好。剖杀后，取小鼠肝脏和脾脏，肝脏指数分别为8.76±1.42、8.05±1.52、8.37±1.74，与模型组（9.91±2.42）相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；脾脏指数分别为1.67±0.51、1.59±0.43、1.72±0.53，与模型组（2.30±0.76）相比显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。肝脏病理结果显示，肝脏内单个虫卵肉芽肿面积分别减小68%、50%、44%，胶原纤维沉积面积分别减少42%、25%、12%。脾脏流式细胞结果显示，BC可显著提高小鼠CD4+细胞比例（P＜0.05）和CD4/CD8比值（P＜0.05）；小柴胡汤、SSA、BC干预均可提高小鼠体内调节性T细胞的比例（P＜0.05）。血清细胞因子检测结果表明，小柴胡汤、SSA、BC干预可下调小鼠Th2型免疫相关细胞因子IL-6、IL-10、TGF-β1和炎症因子TNF-α的表达（P＜0.05）。RT-PCR和Western Blot结果显示，治疗后小鼠肝脏COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1表达均降低（P＜0.05）。<br>　　3.小柴胡汤及其主要成分对体外培养血吸虫成虫生存状态的影响<br>　　复方小柴胡汤随着浓度增加（0.1%、1%、5%），对体外培养成虫存活率有抑制作用，但无统计学意义（P＞0.05）；在5%小柴胡汤作用组，观察到对成虫活动力有显著抑制作用（P＜0.05）；在1%与5%小柴胡汤作用组，观察到成虫产卵量受到显著抑制（P＜0.05）。而单体成分SSA（1μg/ml）作用1h即可显著降低成虫的活动力和存活率（P＜0.05），同时还可降低雌虫的产卵能力（P＜0.05）。实验未观察到BC对血吸虫成虫的生存状态和产卵能力具有显著影响。<br>　　RT-PCR结果显示，与对照组相比，成虫经复方小柴胡汤作用后，sjAQP表达未见显著变化。成虫经SSA作用24h后sjAQP表达上调，作用48h后sjAQP表达下调（P＜0.05）。而在1μg/ml BC作用24h后，sjAQP表达上调，48h后恢复至常态化。<br>　　结论：<br>　　通过细胞实验和动物实验，本研究证实了小柴胡汤及其主要成分可有效干预血吸虫致肝纤维化的进程，其具体的作用机制为：小柴胡汤及其主要成分可抑制肝星状细胞的活化增殖及纤维化相关分子COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA的表达，诱导活化的HSC发生凋亡；上调小鼠Treg细胞，抑制血清中IL-6、IL-10、TGF-β1等Th2型细胞因子的表达，同时抑制小鼠肝脏中COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1的表达，从而缓解虫卵引起的肉芽肿和纤维化症状。进一步观察药物对体外培养血吸虫成虫的影响，发现小柴胡汤及其单体成分SSA可抑制成虫的活动力和繁殖力，从而间接发挥抗血吸虫肝纤维化的作用。其具体机制可能是SSA通过干预虫体体表蛋白sjAQP的表达，影响成虫的生存和繁殖。综上，小柴胡汤复方及其单体成分，具有抑制血吸虫肝纤维化的作用，可以为抗血吸虫肝纤维化新型药物的研发和筛选奠定基础。