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摘要骨骼肌是附着在骨骼上的肌肉组织，是人体三大肌肉组织之一, 参与机体运动和能量代谢。骨骼肌的发育和损伤后修复与成肌细胞密切相关。骨骼肌由成肌细胞发育而来，成肌细胞分化融合形成多核合胞体-肌纤维，肌纤维束状排列最终发育形成骨骼肌。骨骼肌具有显著的再生能力，当其受损时，肌卫星细胞被激活为成肌细胞，成肌细胞分化融合对骨骼肌进行修复。当骨骼肌不能正常发育或损伤修复时，机体会产生各种疾病，如先天性肌病。因此，骨骼肌的正常发育和损伤修复对于机体有重要意义，研究成肌细胞分化融合机制则至关重要。<br>　　研究发现，RASSF4 在人原代成肌细胞的体外分化过程中 mRNA 及蛋白表达水平发生改变，但其是否参与体内肌生成过程及其作用机制尚不清楚。RASSF4与ARF6密切相关：ARF6通过激活PLD和PIP5K产生PA和PIP2从而促进成肌细胞分化融合，而RASSF4与PIP5K联合同样可以调控PIP2的产生；在HeLa细胞中，RASSF4 与 ARF6-GDP 相互作用促进 ARF6 激活。那么在成肌细胞中RASSF4是否能通过作用于ARF6从而调节成肌细胞分化融合？它又是否还有其他作用机制？因此，本论文旨在探讨 RASSF4 是否参与体内外成肌细胞分化融合过程及其作用机制，以进一步阐明成肌细胞分化融合机制，为肌病的治疗提供理论基础。<br>　　目的：<br>　　1. RASSF4是否参与骨骼肌成肌细胞分化融合。<br>　　2. RASSF4调节骨骼肌成肌细胞分化融合的作用机制。<br>　　方法:<br>　　1.利用Western blot及qPCR检测RASSF4在小鼠成肌细胞分化融合过程、骨骼肌发育过程以及骨骼肌损伤后修复过程中的表达情况。<br>　　2.在骨骼肌损伤修复的原代成肌细胞中，通过Western blot及Co-IP来研究RASSF4与ARF6的关系。<br>　　3. 构建RASSF4截短体质粒并转染小鼠成肌细胞系C2C12，观察蛋白定位；通过Western blot检测myogenin、myosin的表达水平来观察其是通过哪一结构域影响成肌细胞分化融合。<br>　　结果：<br>　　1.Western blot及qPCR结果显示RASSF4在小鼠成肌细胞分化融合过程、骨骼肌发育过程以及骨骼肌损伤后修复过程中的表达都升高。<br>　　2.Western blot结果显示，在骨骼肌损伤修复的原代成肌细胞中，RASSF4与ARF6的表达均显著性增加；Co-IP结果显示，无论骨骼肌发不发生损伤修复，原代成肌细胞中，内源性RASSF4都可以和ARF6发生免疫共沉淀，并且在发生损伤修复的原代成肌细胞中结合的更多。<br>　　3. RASSF4的SARAH结构域中可能含有核外转运信号；RASSF4是一种穿梭蛋白；删除 SARAH 结构域后，RASSF4 在核中驻留且可以促进成肌细胞分化融合。<br>　　结论：<br>　　1. RASSF4参与骨骼肌成肌细胞分化融合。<br>　　2. RASSF4通过作用于ARF6调节成肌细胞分化融合。<br>　　3. SARAH结构域决定 RASSF4 的细胞定位，并且删除 SARAH 结构域可促进成肌细胞分化融合。