摘要目的:<br> 明确聚苯乙烯微塑料(Polystyrenemicroplastics,PS-MPs)暴露对大鼠肝脏的毒性作用;探讨PS-MPs暴露对大鼠肝损伤的作用机制,为阐明PS-MPs的毒性作用及其机制,防治PS-MPs所致肝脏损伤提供科学依据。<br> 方法:<br> 选取6周龄SPF级雄性Wistar大鼠48只,适应性喂养1周后,随机分成4组:对照组、低剂量组(0.5mg/kg/d)、中剂量组(5mg/kg/d)和高剂量组(50mg/kg/d),每组12只。采用灌胃方式进行染毒,每天一次,连续染毒90天。低、中、高剂量组给予相应浓度0.5μmPS-MPs,染毒前超声30min使其充分混匀,对照组给予相应体积蒸馏水。每天观察大鼠状态,记录大鼠体重变化、饮食和饮水情况。<br> 末次染毒后禁食24h,麻醉大鼠进行心脏采血并分离血清,取肝脏组织备用。HE染色观察大鼠肝组织病理学改变;采用ELISA法测定大鼠血清和肝脏IL-1和TNF-α水平,肝脏中IL-1β和IL-18水平;采用比色法检测血清和肝脏ALT和AST活力,MDA、SOD和GSH水平;采用流式细胞术测定大鼠肝脏ROS水平和肝脏细胞凋亡情况;采用Real-TimeRCR法检测大鼠肝脏凋亡和焦亡相关基因mRNA表达水平;采用WesternBlot法测定凋亡和焦亡相关蛋白表达水平。使用IBMSPSS24.0软件进行统计分析,计量正态数据用?x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法,检验水准为α=0.05。<br> 结果:<br> 1.PS-MPs暴露后,0.5mg/kg/d和5mg/kg/d组大鼠肝脏出现肝细胞肿胀和肝细胞索排列紊乱,50mg/kg/d组大鼠肝组织中肝细胞界限模糊、肝细胞呈颗粒变性。<br> 2.50mg/kg/d组大鼠血清ALT活力显著高于0.5mg/kg/d组,0.5mg/kg/d和5mg/kg/d组大鼠肝组织ALT活力明显低于对照组(P<0.05)。50mg/kg/d组血清AST活力明显高于0.5mg/kg/d组和5mg/kg/d组,肝脏AST活力明显低于其它各组(P<0.05)。<br> 3.5mg/kg/d组大鼠血清和50mg/kg/d组大鼠肝脏中MDA含量均显著高于对照组和0.5mg/kg/d组(P<0.05)。50mg/kg/d组大鼠血清SOD水平显著低于对照组和5mg/kg/d组(P<0.05);0.5mg/kg/d和5mg/kg/d组大鼠肝脏SOD显著低于对照组(P<0.05),50mg/kg/d组显著高于0.5mg/kg/d和5mg/kg/d组(P<0.05)。大鼠肝脏GSH含量随染毒剂量增加逐渐升高,5mg/kg/d组肝脏GSH含量显著高于对照组(P<0.05),50mg/kg/d组GSH含量显著高于其它各组(P<0.05)。<br> 4.0.5mg/kg/d组大鼠血清IL-1水平显著高于对照组和5mg/kg/d组(P<0.05)。随染毒剂量增加,大鼠肝脏IL-1β、IL-18水平均呈先下降后升高趋势,其中50mg/kg/d组大鼠血清IL-1β水平显著高于0.5mg/kg/d组和5mg/kg/d组(P<0.05),5mg/kg/d组大鼠肝脏IL-18水平显著高于对照组(P<0.05)。<br> 5.0.5mg/kg/d组和5mg/kg/d组大鼠肝脏BaxmRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),50mg/kg/d组BaxmRNA表达水平显著高于0.5mg/kg/d组和5mg/kg/d组(P<0.05)。5mg/kg/d组Bax蛋白表达水平显著高于0.5mg/kg/d组和50mg/kg/d组。50mg/kg/d组Bcl2mRNA表达水平显著高于其它各组(P<0.05)。<br> 6.50mg/kg/d组大鼠肝脏Caspase-1和GSDMDmRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);5mg/kg/d组GSDMD蛋白表达水平显著高于对照组和0.5mg/kg/d组(P<0.05)。<br> 结论:<br> 本研究所观察的0.5μmPS-MPs对大鼠肝脏具有毒性作用。<br> 1.PS-MPs可导致大鼠肝脏出现肝细胞肿胀和肝细胞索排列紊乱,甚至出现肝细胞界限模糊、肝细胞颗粒变性。<br> 2.PS-MPs可引起大鼠肝脏ALT和AST活力增加,引起肝细胞损伤。<br> 3.PS-MPs可导致大鼠血清和肝脏氧化应激指标改变,导致肝细胞内氧化和抗氧化作用失衡,引发大鼠肝脏氧化应激反应。<br> 4.PS-MPs可导致大鼠血清和肝脏炎症因子水平增加,引发大鼠肝脏炎症反应。<br> 5.PS-MPs可导致大鼠肝脏凋亡和焦亡相关基因和蛋白水平改变,促进大鼠肝脏细胞发生细胞凋亡和细胞焦亡,导致大鼠肝脏损伤。
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