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聚苯乙烯微塑料对大鼠结肠的致炎作用及其机制

摘要目的:<br>  明确聚苯乙烯微塑料(polystyrene microplastics,PS-MPs)暴露对大鼠结肠炎症的影响,探讨PS-MPs对大鼠结肠炎症的作用机制,为明确PS-MPs的毒性作用及其机制,防治PS-MPs所致健康危害提供科学依据。<br>  方法:<br>  6周龄SPF级雄性Wistar大鼠48只,适应性喂养1周后,随机分成4组:对照组、0.5mg/kg/d PS-MPs组、5mg/kg/d PS-MPs组和50mg/kg/d PS-MPs组,每组12只。每天灌胃染毒一次,连续染毒90天。染毒组给予相应浓度的0.5μm聚苯乙烯微塑料,对照组给予相应体积蒸馏水。<br>  末次染毒24h后麻醉大鼠,心脏采血并分离血清,取结肠组织。采用ELISA法测定大鼠血清及结肠组织中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平;HE染色法观察大鼠结肠组织病理学改变;Real-Time PCR和Western Blot法检测大鼠结肠组织TLR4/NF-κB/COX-2信号通路基因TLR4、MyD88、IKKβ、COX-2、PGE2的mRNA和蛋白表达水平。<br>  采用IBM SPSS24.0软件进行统计分析,正态分布计量资料采用?x±s表示。采用单因素方差分析进行多组间差异比较,组间两两比较采用LSD检验。TLR4/NF-κB/COX-2信号通路蛋白和炎性因子水平之间的相关性分析采用Pearson相关分析法。检验水准为α=0.05。<br>  结果:<br>  1.大鼠结肠组织杯状细胞减少、肌层排列紊乱,隐窝结构破坏且不连续,5mg/kg/d和50mg/kg/d组大鼠结肠黏膜及黏膜下层可见大量炎细胞浸润。<br>  2.各染毒组大鼠血清IL-1β水平显著高于对照组(P<0.05);5mg/kg/d和50mg/kg/d组大鼠血清中TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05),IL-6水平显著高于对照组和0.5mg/kg/d组(P<0.05)。<br>  3.各染毒组大鼠结肠TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);5mg/kg/d和50mg/kg/d组结肠IL-1β水平显著高于对照组和0.5mg/kg/d组(P<0.05);50mg/kg/d组结肠IL-6水平显著高于对照组(P<0.05)。<br>  4.各染毒组大鼠结肠组织IKKβmRNA表达水平随PS-MPs染毒剂量增加而显著升高(P<0.05);50mg/kg/d组大鼠结肠组织TLR4、MyD88mRNA表达水平显著高于其他各组(P<0.05),COX-2mRNA表达水平显著低于其他各组(P<0.05);5mg/kg/d和50mg/kg/d组大鼠结肠PTGER2mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。<br>  5.50mg/kg/d染毒组大鼠结肠TLR4蛋白表达水平显著高于对照组和0.5mg/kg/d组(P<0.05),MyD88蛋白表达水平显著高于其他各组(P<0.05),IKKβ蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05),COX-2蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05);5mg/kg/d和50mg/kg/d组大鼠结肠PGE2蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。<br>  6.大鼠结肠TLR4和MyD88蛋白表达水平与IL-1β、IL-6、TNF-α水平呈正相关(P<0.05);IKKβ蛋白表达水平与IL-1β水平呈正相关(P<0.05);COX-2蛋白水平与IL-1β和TNF-α表达水平呈负相关(P<0.05);PGE2蛋白水平与IL-1β、TNF-α和IL-6表达水平呈负相关(P<0.05)。<br>  结论:<br>  1.PS-MPs暴露可引起大鼠结肠隐窝结构破坏,黏膜及黏膜下层炎细胞浸润。<br>  2.PS-MPs可引起大鼠血清和结肠炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高。<br>  3.PS-MPs可影响大鼠结肠TLR4/NF-κB/COX-2信号通路基因mRNA和蛋白表达,引起大鼠结肠炎症。

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