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FXⅡ/uPAR通路在显微镜下多血管炎NETs形成中的作用和机制研究

摘要目的:显微镜下型多血管炎(MPA)是我国最常见的抗中性粒细胞胞浆抗体功能,促进中性粒细胞外捕网(NETs)的释放;但在MPA肾损伤疾病中未见报相关性血管炎的临床类型之一,病程进展快易复发,目前临床尚无特异性标志物道。本研究拟观察FⅫ/uPAR通路在中性粒细胞产生释放NETs而导致MPA肾损伤中的作用,为临床判断MPA活动性及其致病机制提供新的依据。监测该疾病的复发。研究发现小鼠皮肤伤口愈合过程中,凝血十二因子(FⅫ)与中性粒细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)相互作用后调控中性粒细胞<br>  方法:1.该研究纳入2020年07月至2021年12月四川省人民医院肾内科初诊为MPA的患者33例和健康志愿者18例,收集临床资料及实验室检查指标,进行数据统计学分析。2.以流式细胞技术检测外周血中性粒细胞uPAR水平,ELISA检测外周血suPAR、FⅫ、NETs等水平。3.对MPA患者肾穿组织予以uPAR、FⅫ、NETs免疫组化染色及uPAR、FⅫ、CD66b免疫荧光共染;4.分离健康者中性粒细胞,给予正常对照组、健康者血清组、佛波酯(PMA)阳性对照组、MPA活跃期血清组、外源性FⅫ组、抗uPAR组、NE抑制组培养中性粒细胞,以Western blot检测细胞GSDMD水平,ELISA检测细胞培养上清液NETs水平。<br>  结果:1.本研究发现MPA活跃组外周血中性粒细胞uPAR水平较健康对照组、MPA缓解组均降低,而FⅫ、NETs水平升高(均p<0.05)。外周血FⅫ水平对应的ROC曲线下面积(AUC=0.81)大于外周血中性粒细胞uPAR水平(AUC=0.76)及suPAR水平(AUC=0.65)。2.免疫组化及荧光结果显示MPA活跃组肾组织中有较多中性粒细胞,uPAR及FⅫ共表达,NETs表达增加。3.Western blot显示PMA组、MPA活跃期患者血清组、外源性FⅫ组中性粒细胞GSDMD水平较健康正常对照组、健康血清组、抗uPAR组、NE抑制组增加(均p<0.05);ELISA实验显示PMA阳性对照组、活跃期MPA血清组及FⅫ组培养上清液NETs水平较健康正常对照组增高(均p<0.05);NE抑制组培养后上清液NE水平较PMA组、活跃期MPA患者血清组及外源性FⅫ组明显降低(均p<0.05)。<br>  结论:1.外周血中性粒细胞uPAR及外周血FⅫ参与MPA发病过程;2.外周血FⅫ水平区分MPA患者活动期与缓解期的预测效能高于中性粒细胞uPAR水平及外周血suPAR水平;3.外源性FⅫ与中性粒细胞uPAR结合可能促进中性粒细胞的活化,且可能激活GSDMD相关通路促进NETs的释放而参与MPA的肾损伤。

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