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摘要内质网（endoplasmic reticulum,ER）和晚期内吞体/溶酶体（late endosome/lysosomes,LE/lys）之间的膜接触位点（membrane contact sites,MCSs）是多种重要细胞活动（内吞体成熟、运输以及细胞内脂质和离子稳态维持）的调控枢纽，其异常与神经系统疾病的发生密切相关。然而，关于这些MCSs的组成、调控和功能目前仍不清楚。<br>　　目的：鉴定未知的ER-LE/lys MCSs关键蛋白，研究关键新分子在ER-LE/lys MCSs的作用及细胞生物学功能。<br>　　方法：通过免疫共沉淀结合质谱分析，鉴定了与已知的ER-LE/lys MCSs系链蛋白Protrudin相互作用的蛋白。其中，一个含有SMP结构域的蛋白PDZD8，由于其潜在的脂质转移活性，引起了我们的极大兴趣。首先通过活细胞共聚焦成像，研究了PDZD8与Protrudin的细胞定位，发现PDZD8与Protrudin存在较好的共定位，提示PDZD8是定位于ER-LE/lys MCSs的蛋白。进一步通过Lattice-SIM超高分辨率成像验证了PDZD8相对于ER-LE/lys MCSs和ER-线粒体膜接触位点的定位。根据蛋白质结构域分析，构建了PDZD8的多个截断突变体。通过活细胞共聚焦成像，鉴定了PDZD8靶向ER和LE/lys的区域。利用质谱鉴定与PDZD8相互作用的LE/lys膜蛋白，通过活细胞共聚焦成像和pull-down实验发现PDZD8-C1-CC区域直接结合活性形式的小GTPase Rab7，从而靶向LE/lys。接下来系统研究了PDZD8的脂质结合和转运能力。通过质谱分析，结合体外脂质结合实验，研究了PDZD8的脂质结合能力。进一步，通过基于荧光共振能量转移的体外脂质转移实验，检测了SMP结构域在脂质体膜间转移脂质的能力。功能上，通过PDZD8敲降实验，研究了PDZD8对于LE/lys的分布影响，进一步利用NGF诱导的PC12细胞分化来研究PDZD8是否在神经元突起生长中起重要作用。<br>　　结果：发现PDZD8是直接介导ER-LE/lys MCSs形成的系链蛋白，并与ER-LE/lys MCSs的系链蛋白Protrudin的TM结构域相互作用。PDZD8通过其N端的TM结构域锚定在ER膜上，通过其C端的C1-CC区域直接与Rab7结合靶向LE/lys。PDZD8介导的ER-LE/lys MCSs受Rab7活性的调控。PDZD8的SMP结构域可以在细胞内和体外结合甘油磷脂和神经酰胺，并在体外介导脂质在脂质体膜间转运。在功能上，PDZD8对于LE/lys的胞内正向运输和神经元突起的生长至关重要。同时，发现PDZD8的这些细胞生物学功能依赖于PDZD8的SMP结构域的脂质转移活性。<br>　　结论：PDZD8能够直接介导ER-LE/lys MCSs的形成。PDZD8的SMP结构域结合并转运甘油磷脂和神经酰胺。PDZD8在LE/lys的胞内正向运输和神经元突起的生长过程中起到重要作用。PDZD8的SMP结构域介导的脂质转移是LE/lys转运和神经元突起生长的关键调控因子。