检索历史 清除

摘要目的：<br>　　抽动症是一种常见的神经精神疾病，主要症状为多种运动抽动和发声抽动。大量研究发现，皮层—纹状体—丘脑—皮层通路的异常是抽动症的主要病理基础，黑质纹状体多巴胺系统功能亢进是其主要原因。针刺治疗抽动症疗效显著，但其机制尚未明确。本论文研究针刺治疗抽动症的机制，首先观察针刺对抽动症模型小鼠抽动行为的影响，探讨脑内多巴胺系统是否参与针刺治疗抽动症的神经生物学机制。然后，探索化学遗传兴奋或抑制背侧纹状体、黑质致密部中表达多巴胺D1、D2受体的神经元，对小鼠抽动行为的影响，观察其能否模拟针刺作用。继而观察手针及不同频率的电针对抽动症转基因模型小鼠抽动行为的影响，筛选出针刺治疗抽动症的最佳治疗方案。最后，观察针刺对黑质纹状体中内源性大麻素CB1受体的调节作用，进一步探讨CB1受体是否参与针刺调控脑内多巴胺系统从而治疗抽动症的机制。本研究不仅有助于阐明针刺治疗抽动症的神经生物学机制，也有助于针刺治疗抽动症的临床推广和应用。<br>　　方法：<br>　　（1）药物诱导抽动症模型小鼠是在Balb/c背景的野生型小鼠和C57BL/6背景的D1R-cre、D2R-cre、CB1R flox小鼠腹腔注射3,3’-氨基二丙腈（3,3’-Iminodipropionitrile，IDPN）7天来诱导抽动症模型。抽动症转基因模型小鼠（D1CT-7小鼠）无需造模，饲养至3周即出现抽动症表型。<br>　　（2）采用化学遗传学策略，将兴奋性化学遗传病毒、抑制性化学遗传病毒、空载对照病毒，通过脑立体定位仪分别微量注射到D1R-cre小鼠、D2R-cre小鼠、同窝野生小鼠的双侧背侧纹状体或黑质致密部，以化学遗传兴奋或抑制表达D1R或D2R的神经元。<br>　　（3）采用手针、2Hz低频电针、100Hz高频电针和假针刺治疗，穴位选用“百会”和“印堂”穴，以筛选针刺治疗抽动症的最佳治疗方案。<br>　　（4）将逆行TH-cre病毒微量注射到CB1R flox小鼠及其同窝野生对照小鼠的双侧背侧纹状体，以选择性敲除DA能神经元上的CB1受体。<br>　　（5）采用抽动刻板行为测试、疲劳转棒测试、前肢抓力测试和旷场测试评估各组小鼠的抽动相关行为。<br>　　（6）采用荧光分光光度法检测背侧纹状体、黑质致密部、前额叶皮层和丘脑的多巴胺含量。<br>　　（7）采用Western blot方法检测纹状体、黑质致密部、前额叶皮层和丘脑的多巴胺D1、D2受体和酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）表达，检测背侧纹状体、黑质致密部的CB1受体表达。<br>　　（8）采用免疫荧光组织化学技术标记纹状体、黑质致密部、前额叶皮层和丘脑的多巴胺D1、D2受体阳性神经元和TH阳性多巴胺能神经元，检测化学遗传病毒与D1、D2受体的共标情况，检测黑质致密部TH阳性神经元和星型胶质细胞（GFAP阳性）上CB1受体的表达，判断DA能神经元上CB1受体是否被选择性敲除。<br>　　结果：<br>　　（1）针刺降低了纹状体、黑质致密部和前额叶皮层中多巴胺的含量，但没有影响丘脑中多巴胺的含量。针刺下调了纹状体和黑质致密部中D1、D2受体以及黑质致密部中TH的表达，同时也下调了前额叶皮层中D1受体的表达。针刺未影响前额叶皮层中D2受体和丘脑中D1、D2受体的表达。<br>　　（2）化学遗传抑制背侧纹状体表达D1或D2受体的神经元后，抽动症模型小鼠的抽动刻板症状减轻；化学遗传兴奋背侧纹状体表达D1受体的神经元后，溶媒对照组小鼠的抽动刻板症状加重，但未影响抽动症模型小鼠的抽动刻板症状；化学遗传兴奋背侧纹状体表达D2受体的神经元对各组小鼠的抽动刻板症状无影响。<br>　　（3）化学遗传抑制黑质致密部表达D1或D2受体的神经元后，抽动症模型小鼠的抽动刻板症状减轻；化学遗传兴奋黑质致密部表达D1或D2受体的神经元对各组小鼠的抽动刻板症状无影响。<br>　　（4）手针和低频电针而非高频电针减轻了D1CT-7小鼠的抽动刻板症状，减少了其在旷场中的活动，对前肢肌力无影响。<br>　　（5）手针和低频电针增加了抽动症模型小鼠黑质致密部中TH阳性神经元上CB1受体的表达，降低了背侧纹状体和黑质致密部中多巴胺的含量。特异性敲除投射到背侧纹状体的黑质致密部的多巴胺能神经末梢上的CB1受体后，手针和低频电针对抽动症模型小鼠的抽动刻板症状和背侧纹状体、黑质致密部中多巴胺的含量无明显影响。<br>　　结论：<br>　　（1）针刺可通过上调背侧纹状体和黑质致密部中的CB1受体，抑制多巴胺的合成和释放，从而降低黑质纹状体中多巴胺的含量及其D1、D2受体的表达，来减轻抽动症模型小鼠的抽动刻板症状，为针刺治疗抽动症提供了理论基础。<br>　　（2）本研究发现手针和低频电针均能减轻抽动症模型小鼠的抽动刻板症状，而高频电针没有疗效，为临床上针刺治疗抽动症提供优化的治疗方案。<br>　　（3）抑制背侧纹状体或黑质致密部表达D1或D2受体的神经元后，模拟了针刺治疗抽动症的作用，减轻了抽动症模型小鼠的抽动刻板症状，为抽动症的治疗提供了新的靶点。