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摘要外泌体是起源于内体的纳米级细胞外小泡，近年来，研究发现外泌体含有丰富的miRNA，此外还包含各种脂质和蛋白质，可由多种细胞释放到细胞外和体液中，是细胞间通讯和分子转移的一种方式，在生理病理上起着重要的作用。最近越来越多的研究表明外泌体具有免疫活性，具体表现在调节抗原提呈、免疫激活、免疫抑制、免疫监测等方面。<br>　　人类LXN基因编码的LXN蛋白由222个氨基酸组成，是一种羧肽酶抑制剂。有大量数据证明LXN有多种生理功能，包括调节骨髓造血干细胞、调节炎症以及调节免疫功能。在M1型巨噬细胞中，LXN高度表达，并且与巨噬细胞的极化相关；在口服耐受性T细胞中，LXN表达上调且基因甲基化下降。最近研究发现，LXN是一种“分泌蛋白”，Seed等人观察到LXN在PNT1A和PC3细胞系中以外泌体的方式分泌到培养基中。因此，我们检测了LXN在巨噬细胞中的分泌情况，并探究巨噬细胞外泌体中的LXN在免疫调节中的作用。<br>　　第一，我们通过WesternBlot检测LXN在巨噬细胞中的分泌情况，然后通过超速离心法对巨噬细胞的外泌体进行提取，最后运用WesternBlot、细胞免疫荧光、免疫胶体金等技术检测LXN在外泌体中的表达。结果显示，在小鼠腹腔巨噬细胞以及小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中，LXN从细胞分泌到培养基。我们对细胞培养基的外泌体提取并检测，发现外泌体中有LXN的表达。以上结果说明在小鼠腹腔巨噬细胞以及小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中，LXN以外泌体的形式从细胞分泌到培养基中。<br>　　为了进一步研究LXN的分泌情况，我们运用免疫荧光的方法检测几种病理组织切片中LXN的表达，此外对人和小鼠的血液进行外泌体提取，并检测外泌体中LXN的表达。我们对人动脉粥样硬化斑块切片、人结肠癌组织切片以及人结肠癌旁组织切片进行LXN与TSG101的荧光染色，发现在这些组织切片中存在LXN与TSG101的共定位现象。WesternBlot结果显示，LXN在人和小鼠血液的外泌体中表达。以上结果说明LXN可以以外泌体的形式分布在到组织病灶周围以及血液中。<br>　　第二，我们研究了小鼠腹腔巨噬细胞外泌体中LXN的免疫功能，首先我们探究小鼠腹腔巨噬细胞外泌体中的LXN对Jurkat细胞的活化作用。活化的Jurkat细胞与巨噬细胞通过Transwell小室共培养，RT-PCR结果显示含有LXN的野生型（WT）小鼠巨噬细胞可以促进Jurkat细胞的活化。外泌体具备其来源细胞的一些特质，所以接下来我们用巨噬细胞外泌体处理Jurkat细胞，WT型巨噬细胞分泌的外泌体可以促进Jurkat细胞的活化，而KO型巨噬细胞外泌体则抑制巨噬细胞的活化。接下来我们在小鼠腹腔巨噬细胞与Jurkat细胞的Transwell共培养体系中加入外泌体抑制剂GW4869，我们发现WT型巨噬细胞的活化作用以及KO型巨噬细胞的抑制作用都有所降低。以上实验结果提示我们WT型巨噬细胞外泌体可以活化Jurkat细胞。<br>　　接下来我们探究小鼠腹腔巨噬细胞外泌体中的LXN对T淋巴细胞的分化作用。WT型巨噬细胞外泌体、KO型巨噬细胞外泌体分别与活化后的T淋巴细胞共培养，流式细胞术检测各组CD3+T细胞中CD4+T细胞和CD8+T细胞的占比，以及CD4+T细胞中TH1细胞、TH17细胞以及Treg细胞的占比。我们发现外泌体中的LXN促进CD4+T细胞的增殖并抑制CD4+T细胞向Treg细胞分化。在促进肿瘤细胞凋亡方面，我们发现与KO型巨噬细胞外泌体相比，含有LXN的巨噬细胞外泌体促MGC-803细胞凋亡的能力更强。<br>　　为了进一步确定小鼠腹腔巨噬细胞外泌体中LXN的免疫功能，我们构建了C57BL/6小鼠的MC38细胞皮下荷瘤模型。观测肿瘤生长情况，我们发现与KO型外泌体处理组相比，WT型外泌体处理组的小鼠肿瘤生长更为缓慢、体积更小。流式细胞术检测三组小鼠肿瘤以及脾脏组织中各种T细胞的占比情况，结果显示在脾脏组织中，与KO型外泌体处理组相比，WT型外泌体处理组有更多的CD4+T细胞；在肿瘤组织中，与KO型外泌体处理组相比，WT型外泌体处理组有更多的CD4+T细胞以及更少的Treg细胞，同时免疫组化的结果也显示在肿瘤组织中WT型巨噬细胞处理组与KO型巨噬细胞处理组相比拥有更少的Treg细胞。这些结果说明小鼠腹腔巨噬细胞外泌体中的LXN参与小鼠MC38细胞皮下肿瘤生长过程中的免疫调节。<br>　　最后通过探究LXN蛋白的免疫学功能，我们确定LXN可以促进T细胞的激活并且抑制CD4+T细胞向Treg细胞的分化。<br>　　综上所述，本论文围绕外泌体来源的LXN对免疫系统的调节作用展开研究。主要探究了LXN在巨噬细胞中的分泌途径；分析了巨噬细胞外泌体中的LXN在体内体外对T细胞活化及分化的影响。