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摘要目的：<br>　　糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病主要的微血管并发症之一。本文旨在探讨在糖尿病肾病小鼠模型中TRPC6/NFAT2信号通路对肾小球纤维化的影响以及人参皂苷Rg1的干预作用。<br>　　方法：<br>　　雄性C57BL/6J小鼠，高脂饲料(high-fat diet,HFD)饲养8周后分为七组（n=8），正常对照组、HFD组、HFD+STZ组、HFD+STZ+MET（200mg/kg）和HFD+STZ+Rg1（1，5，10mg/kg），腹腔注射STZ（110mg/kg）72小时和一周后尾静脉采血测量空腹血糖水平，其大于或等于16.7mmol/L的小鼠挑选入组。给药组灌胃给药治疗8周，其他组分别给予等体积溶媒(0.5%CMC-Na+水溶液)作用8周。HFD饲养8周后分为五组（n=8），野生型小鼠对照组、TRPC6-/-对照组、野生型小鼠+HFD+STZ组、TRPC6-/-+HFD以及TRPC6-/-+HFD+STZ组。正常对照组给予标准饮食，其他组给予高脂饮食干预8周。实验期间观察小鼠的一般情况。采用检测试剂盒测量各组尿蛋白，血清中各种生化指标以及肾组织匀浆中FFA的含量。油红和尼罗红染色检测小鼠肾皮质脂类物质的变化情况。ELISA检测肾组织匀浆中DAG和IP3的含量。HE染色观察肾小球和肾小管的病理形态变化。PAS染色检测糖蛋白和一些可以评估肾脏损伤的酸性物质的积累。Masson染色评估肾小球的胶原沉积情况。IHC检测小鼠肾皮质CD36和p-PLC的表达。IF检测FN和COL4的分布和表达情况。WB检测小鼠肾脏钙通道，纤维化和相关通路蛋白的表达情况。PCR检测小鼠肾脏COL4,FN的mRNA水平。透射电镜观察肾小球系膜增生情况。<br>　　结果：<br>　　1.小鼠体征和血清生化实验结果显示：HFD不同程度地上调了血清尿素氮，肌酐，血脂，尿蛋白和FFA水平。HFD+STZ联合作用增加了上述指标的含量。Rg1可逆转造模后上述指标的变化。与野生型造模组相比，TRPC6-/-小鼠造模后体征的变化程度有所下降。<br>　　2.油红和尼罗红染色结果显示：HFD和HFD+STZ组都增加了小鼠肾脏的脂质沉积，Rg1可以明显改善造模引起的脂质沉积。<br>　　3.ELISA实验结果显示：HFD和HFD+STZ组都上调小鼠肾组织匀浆的DAG的含量，后者更加明显。Rg1可以明显逆转造模后DAG含量的增加。IP3检测结果与DAG相似。<br>　　4.免疫组化结果显示：HFD和HFD+STZ组都上调CD36和p-PLC的表达。二甲双胍和Rg1可以不同程度地逆转CD36和p-PLC蛋白的增加。该结果与其Western Blot结果一致。TRPC6-/-小鼠造模组肾脏COL4和FN的表达也有所上调，但与野生型造模组相比这两者的表达都有所下降。<br>　　5.HE,PAS和Masson染色结果显示：HFD和HFD+STZ组肾小球和肾小管组织出现了损伤;肾小管上皮细胞和基质中沉积的酸性糖蛋白增加，肾小球酸性糖蛋白沉积的面积和水平增加;肾小球和肾间质纤维化程度明显增加。而Rg1可以逆转上述的一些病理变化。TRPC6-/-小鼠造模组上述的一些病理变化得到一定程度的改善。<br>　　6.免疫荧光,PCR和Westernblot检测小鼠肾脏FN，COL4蛋白和mRNA的表达：HFD和HFD+STZ组肾小球中FN和COL4的表达上调，Rg1能抑制高脂和高糖诱导的这种作用，PCR和Western blot同样证实了这一点。<br>　　7.Westernblotting检测小鼠肾脏蛋白表达情况：HFD和HFD+STZ组肾脏中TGF-β，p-Smad2/3，TRPC6，CN和NFAT2的表达上调，Rg1能抑制高脂和高糖诱导的这种作用。TRPC6-/-小鼠肾脏中TRPC6几乎无表达，TRPC6-/-小鼠造模组肾脏中CD36，p-PLC仍有较高水平的表达，而其下游CN和NFAT2蛋白的表达上调程度有所减弱，值得注意是TGF-β，p-Smad2/3的表达上调程度也有所减弱。<br>　　8.透射电镜结果显示：TRPC6-/-小鼠造模组损伤程度得到改善，无系膜增生情况，足突部分融合，染色质边集减少，系膜基质减少。<br>　　结论：<br>　　HFD能够增加肾脏细胞对FFA的摄取，增加胞内脂质蓄积，特别是能够增加DAG及IP3的生成，其机制可能与HFD诱导HMC细胞CD36表达，促进PLC磷酸化有关。STZ与HFD发挥协同作用。而Rg1可以改善高脂和高糖造模后的肾脏病理进程，改善肾小球纤维化情况。当敲除TRPC6后可以抑制TGF-β/Smad信号通路的激活，减轻小鼠肾脏的纤维化程度。