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桑叶提取物润肠通便功能的研究

摘要桑树是药食两用植物,在我国种植广泛,前期研究发现桑叶粉有促进便秘模型鼠排便的作用,为了深入探讨桑叶的润肠通便作用,本论文跟踪筛选桑叶润肠通便活性成分群,在此基础上探讨桑叶活性成分群的润肠通便作用机制,并且应用网络药理学的方法预测发挥作用的单体化合物。研究结果如下:<br>  1、桑叶提取物润肠通便活性成分群的跟踪筛选。用不同极性溶剂依次提取桑叶粉,得到桑叶石油醚提取物(PEE)、乙酸乙酯提取物(EAE)、无水乙醇提取物(AEE)、水提取物(AE)以及经无水乙醇处理后的脱蛋白脱多糖提取物(DAE),各提取物得率分别为4.33%、2.33%、1.59%、13.30%、8.74%。上述提取物灌胃小肠蠕动抑制模型鼠(IPIMM),以小肠推进率为指标评价,AEE、AE和DAE的小肠推进率分别是58.29%±7.01%、61.77%±8.94%和65.42%±9.58%,显著高于模型组(MC),与正常对照组(NC)和阳性对照组(PC)无显著差异。将AEE与DAE合并离心后,用制备型液相色谱分离,甲醇和水梯度洗脱,每6min收集一组,共5组,冻干后得到P1~P5。用P1~P5灌胃IPIMM,当P1剂量为1.0、1.5g/kg·bw时,小肠推进率分别为72.57%±6.53%和65.54%±12.06%,与NC和PC的小肠推进率无显著差异。<br>  2、P1润肠通便作用的研究。用洛哌丁胺灌胃便秘模型小鼠后,MC组的首便时间比NC组的显著增加,6h排黑便数量和粪便含水率显著低于NC组,经P1治疗后,便秘模型小鼠的首便时间显著降低、6h排黑便数量和粪便含水率显著提高,达到NC组的水平。P1能显著提高便秘模型小鼠乙酸、丙酸、丁酸及总短链脂肪酸含量和MTL、Ach兴奋性递质水平,降低VIP、SS抑制性递质水平;增加结肠组织平滑肌增厚和杯状细胞数量;上调c-Kit/SCF信号通路中c-Kit及SCFmRNA表达水平同时显著降低水通道蛋白(AQP3)的mRNA水平以及PI3K/Akt信号通路中PI3K、AktmRNA表达水平。<br>  3、基于网络药理学及分子对接技术的P1效应成分的预测。P1经质谱信息比对分析,得到58种化合物。经口服生物利用度和类药性筛选后最终保留了γ-氨基丁酸(GABA)等7个候选化合物。通过SwissTargetPrediction等数据库获取候选化合物潜在作用靶点和便秘相关靶点;筛选获得两者的共同靶标后,利用STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI)。通过Cytoscape软件筛选出候选化合物的30个关键靶点;采用分子对接实验验证候选化合物和关键靶点的结合能力,其中白藜芦醇、槲皮素、原儿茶酸、异鼠李素、绿原酸、γ-氨基丁酸等化合物与关键靶点的对接构象合理,它们在P1中的含量分别是8.705、13.925、107.171、2.539、114.863、871.676ng/mg。

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