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寇氏隐甲藻的形貌及运动行为表征

摘要寇氏隐甲藻由于高产DHA而备受关注,但对其研究大多是在发酵方面,而在形貌和运动行为方面则相对较少。本文主要利用显微追踪技术,通过对寇氏隐甲藻实时观察,研究其形貌和运动行为在其生命周期中的变化。该研究能够加深对于寇氏隐甲藻生理活动的理解,有助于开发提高DHA产量的新方法。<br>  本文对寇氏隐甲藻形貌的研究中,通过倒置荧光显微镜分别对其分裂行为和对尼罗红染色后的细胞内的油脂进行了观察,我们发现寇氏隐甲藻形貌的不同主要表现为囊孢细胞与游泳细胞的转换,即囊孢细胞呈圆形,没有鞭毛,而游泳细胞一般呈椭圆形,有两条不同的鞭毛。除此之外,油脂含量较多的细胞其细胞体外部相对表现的更不透明且滴状更大更多。通过扫描电子显微镜对分别采用传统样品制备法和基于模板的二氧化硅复制法处理过的寇氏隐甲藻细胞进行观察,以期能更好的了解其外部表面结构,但目前只能看到圆形的细胞体和脱落的鞭毛。<br>  本文对寇氏隐甲藻运动行为的研究中,我们结合细胞的运动过程和其在二维平面的投影轨迹将其分为五种运动方式,分别是波浪运动、反转运动、转向运动、直行运动和旋转运动。其中波浪运动观测到的概率最大,其自转周期在0.2-0.6s,自转方向更倾向于顺时针自转,且顺时针自转快于逆时针,其运动轨迹通常表现为行进速度较慢且通常具有较大的曲率半径,较小的转角。反转运动是使细胞突然掉头向与原来运动方向相反的方向开始运动,根据反转发生的平面可分为垂直反转,水平反转和其它方向的反转,且观测到其概率相差不大。转向运动是基本发生在二维平面的转向角度小于120°的运动行为。旋转运动和直行运动发生概率较小,其中旋转运动更倾向于顺时针旋转,而且旋转运动的旋转半径多小于20μm。在五种运动形式中,直行运动的平均速率最大(220μm/s),旋转运动的平均速率最小(120μm/s)。在五种运动的单个藻细胞的MSD与?t的双对数关系图中,我们发现由于运动方式的不同,其他运动基本一直呈现线性关系,而旋转运动和反转运动在后期会出现上下波动的现象。通过计算平均MSD斜率,结果显示直行运动的斜率最大,为1.9392;旋转运动的斜率最小,为1.6293,说明其都为超扩散运动,但直行运动的细胞扩散速率最快,旋转运动的细胞扩散速率最慢。除此之外,波浪运动,直行运动以及转向运动是边自转边前进的,它们在三维空间中的运动形式类似于螺旋式运动。由此可见,运动方式不同,其表现也不尽相同。

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