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摘要背景：<br>　　肿瘤抑制因子LKB1（Liver kinase B1）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。生殖系细胞LKB1功能的缺失或突变诱发一种常染色体显性遗传病—Peutz-Jeghers综合征，其以胃肠道息肉、皮肤与口腔色素斑形成和癌变高发为主要特征。大量临床病理学研究表明Peutz-Jeghers综合征患者的胃肠道息肉具有典型的炎性症状，常伴随着T淋巴细胞等炎症细胞浸润。同时利用Cre/LoxP技术建立T淋巴细胞特异性LKB1敲除的转基因杂合子小鼠也形成炎性胃肠道息肉，提示T淋巴细胞中的LKB1具有调控炎症反应功能，但其中分子机制尚无研究。长期研究发现，当细胞处于营养/能量缺失状态下，AMP:ATP比例失调，蛋白激酶LKB1通过活化AMPK复合体抑制蛋白质合成、脂类合成等耗能途径，促进糖酵解、谷氨酰胺分解等产能途径，维持胞内ATP的含量与基本生命活动。但LKB1-AMPK对炎症信号的调节作用与分子机制尚有待探究。T细胞受体（TCR）信号诱导的CARD11-BCL-10-MALT1（CBM）复合体组成，进而激活NF-κB炎症信号通路，启动下游靶基因转录表达，参与了T细胞增殖、分化与免疫应答，在T细胞免疫活化与炎症反应过程中发挥关键作用。长久以来，对于T细胞中LKB1-AMPK的信号研究集中于营养缺失条件下或TCR信号活化后的代谢重编程作用，在营养缺失条件下对于炎症信号尤其是NF-κB信号的调控机制尚无研究。因此探索LKB1-AMPK对T细胞NF-κB信号的影响，为理解营养代谢对T细胞功能与炎症反应的调节作用提供了全新的视角与思路。<br>　　方法：<br>　　（1）在LKB1缺失的细胞系(HeLa、A549)中回输LKB1或利用重组慢病毒介导的shRNA静默T细胞系(Jurkat)中敲低LKB1，通过Western Blot（WB）检测NF-κB信号的变化（IκB-α蛋白水平），研究LKB1能否调控NF-κB炎症信号。<br>　　（2）使用葡萄糖饥饿或二甲双胍处理两种LKB1激活条件刺激Jurkat细胞，通过WB与qPCR分别检测IκB-α蛋白水平与TNF-α的mRNA水平。<br>　　（3）在利用CD3,CD28单克隆抗体活化Jurkat细胞TCR信号的同时，使用二甲双胍同时刺激Jurkat细胞LKB1-AMPK信号，通过qPCR检测NF-κB信号所调控的下游分子IL-2，TNF-α的mRNA水平变化。<br>　　（4）利用葡萄糖饥饿或二甲双胍刺激LKB1、BCL-10或MALT1静默的Jurkat细胞株，通过WB比较这三株与野生型细胞的NF-κB信号的差别，分析这三个分子在营养/能量缺失状态下对NF-κB信号的调控作用。<br>　　（5）利用免疫共沉淀检测葡萄糖饥饿条件下BCL-10与MALT1结合作用的变化，研究BCL-10与MALT1复合体形成是否接受营养信号调控；<br>　　（6）在AMPK-α1/2敲除的MEF细胞中通过免疫共沉淀检测BCL-10与MALT1结合变化，研究两者结合是否接受AMPK调控。<br>　　（7）在AMPK-α1/2敲除的MEF细胞中通过重组逆转录病毒回输野生型AMPK-α1或蛋白激酶失活突变的AMPK-α1-K45R，然后通过免疫共沉淀研究BCL-10与MALT1结合是否依赖AMPK蛋白激酶活性。<br>　　（8）利用免疫共沉淀验证AMPK各个亚基与BCL-10是否存在结合，探究AMPK直接调控BCL-10的可能性。<br>　　（9）通过Phos-tag研究葡萄糖饥饿时BCL-10的磷酸化水平。<br>　　（10）通过BCL-10定点突变与体外蛋白激酶实验探究BCL-10的磷酸化位点与上游蛋白激酶。<br>　　（11）通过免疫共沉淀检测BCL-10S138位点的磷酸化对与MALT1结合的影响。<br>　　结果：<br>　　（1）LKB1基因在多种细胞中抑制NF-κB信号：在HeLa、A549与Jurkat中LKB1的表达水平与IκB-α蛋白水平呈正比。<br>　　（2）LKB1-AMPK活化抑制T细胞的NF-κB信号：葡萄糖饥饿或二甲双胍处理刺激Jurkat后IκB-α蛋白水平上升同时TNF-α的mRNA水平下降；利用CD3,CD28单抗与二甲双胍共同刺激Jurkat细胞时，IL-2与TNF-α的mRNA水平受到显著抑制。<br>　　（3）营养/能量缺失条件抑制T细胞NF-κB信号依赖于LKB1、BCL-10与MALT1的存在：LKB1、BCL-10或MALT1静默Jurkat细胞株利用葡萄糖饥饿或二甲双胍处理后，IκB-α蛋白增长水平与野生型相比显著下降。<br>　　（4）营养信号激活的LKB1-AMPK信号调控BCL-10与MALT1复合体的形成：葡萄糖饥饿、AMPK-α1/2敲除与AMPK-α1激酶活性缺失均抑制BCL-10与MALT1复合体的形成。<br>　　（5）AMPK复合体与BCL-10存在直接结合：胞内BCL-10与AMPK-α1、AMPK-β1、AMPK-γ1均存在结合作用。<br>　　（6）LKB1-AMPK活化时BCL-10受到磷酸化修饰：葡萄糖饥饿时BCL-10磷酸化水平升高，138S/A突变后磷酸化条带消失。<br>　　（7）BCL-10S138位点的磷酸化调控其与MALT1复合体形成：BCL-10-138S/A突变去磷酸化后，BCL-10与MALT1结合能力增强。<br>　　结论：<br>　　T细胞在营养/能量缺失（葡萄糖饥饿或二甲双胍处理）条件下，激活LKB1-AMPK信号，通过AMPK磷酸化修饰抑制BCL-10-MALT1复合体的形成，下调NF-κB信号水平，同时抑制CD3,CD28介导的TCR活化NF-κB信号。