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摘要目的脓毒症引起的肝肾损伤是脓毒症患者死亡的重要原因，NF-κB激活导致的过度炎症反应在其中起关键作用。除多种细胞因子能通过正反馈促进NF-κB活化外，内外源性危险因素还能通过诱导Sirt1下调进一步激活NF-κB，从而加重脓毒症炎症反应及肝肾损伤。近年来发现血清外泌体在脓毒症中具有重要作用，但具体作用机制仍未阐明。本研究拟明确脓毒症期间血清外泌体的变化情况，探索外泌体是否通过自身成分变化以及Sirt1/NF-κB信号通路参与调控脓毒症大鼠炎症反应及肝肾功能损伤，从而影响病情进展。<br>　　方法通过腹腔注射脂多糖（LPS）构建脓毒症大鼠模型，同时采用外泌体抑制剂（GW4869）进行干预。Wistar雄性大鼠随机分为4组：对照组（Control组）、脓毒症模型组（LPS组）、外泌体抑制剂组（GW4869组）、外泌体抑制剂+脓毒症模型组（GW4869+LPS组），造模24小时后收集大鼠血清、肝脏和肾脏标本。采用超速离心法提取各组大鼠血清外泌体，通过透射电镜及外泌体标志蛋白（CD9、CD63）免疫印迹检测进行外泌体表征鉴定，并测定外泌体蛋白质浓度及外泌体装载的促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量。同时量化循环炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）及肝肾功能指标（AST、ALT、Cr、BUN），HE染色后光镜下观察肝肾组织病理学改变，并通过免疫印迹检测各组大鼠肝肾组织中Sirt1及NF-κBp65的表达情况。<br>　　结果（1）超速离心法分离提取的大鼠血清外泌体呈圆形或椭圆形的囊泡结构，囊泡膜清晰完整（可见类似细胞膜的双层膜结构），大小不均，有的聚集在一起，平均尺寸为73.23109±29.86458nm，直径40-120nm的外泌体约占84.9%，并且均表达典型外泌体标志蛋白CD9和CD63。（2）与Control组比较，单用GW4869显著降低了外泌体总体蛋白质浓度，但对外泌体中促炎细胞因子比例、循环炎症介质及肝肾功能影响不大。（3）所有经LPS处理的大鼠血清外泌体总体蛋白质浓度及单位外泌体蛋白质中促炎细胞因子的表达水平均显著升高，同时血清中促炎细胞因子也相应升高，肝肾组织中Sirt1表达受到抑制而NF-κBp65表达上调，肝肾组织损伤加重。（4）在进行LPS诱导脓毒症前应用外泌体抑制剂GW4869预处理不仅降低了LPS刺激引起的外泌体总蛋白浓度及炎症介质比例上升幅度，还能降低血清中炎症因子升高及肝肾组织中NF-κBp65上调的幅度，并减轻肝肾组织中Sirt1受抑程度，最终缓解脓毒症引起的肝肾损伤。<br>　　结论（1）超速离心法分离提取大鼠血清外泌体具有可行性。（2）健康大鼠短期应用GW4869对外泌体总蛋白影响更显著，且未引起大鼠炎症反应及肝肾损伤。（3）脓毒症期间大鼠血清外泌体蛋白质浓度及其内含的促炎细胞因子比例显著升高，导致外泌体可能直接释放更多炎症介质正反馈促进NF-κB活化并且传递更多信号至靶细胞负向调控Sirt1进一步激活NF-кB，共同放大炎症信号，参与炎症风暴的形成，最终加重炎症反应和肝肾组织损伤。（4）外泌体预干预能有效降低危险因素（如LPS）刺激导致的血清外泌体成分变化幅度并减轻脓毒症炎症反应及肝肾损伤。