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基于内质网应激探讨消肾方改善糖尿病肾脏疾病系膜细胞凋亡的作用和机制研究

摘要目的:通过消肾方(黄连、水蛭、金樱子、芡实、赤芍、酒大黄、生姜等)干预糖尿病肾脏疾病(Diabetickidneydisease,DKD)大鼠,检测肾组织中诱导系膜细胞凋亡的内质网应激(ERS)相关的分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP-78)、活化转录因子6(ATF6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达情况,探讨消肾方对DKD大鼠相关的作用和机制,丰富消肾方临床应用的理论依据,为中医药辨治DKD拓宽思路。<br>  方法:将雄性SD大鼠禁食、不禁水,12h后一次性大剂量(60mg/kg)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)以制备糖尿病动物模型。72h后,血糖值≥16.7mmol/L的大鼠视为模型制备成功。造模组大鼠完全随机分为5组:模型组,阳性组(氯沙坦钾组),消肾方高、中、低剂量组。连续灌胃给药12周后,观测大鼠一般情况、肾脏系数,检测大鼠血糖、血脂、尿肌酐等生化指标,运用ELISA法测定肾组织中GRP-78、ATF6、CHOP、Bcl-2的表达情况。<br>  结果:<br>  1一般情况:与空白组相比,其余各组大鼠精神稍差,活动变缓,进食量增加,饮水量显著增加,小便量明显增加,被毛污浊,体重增长放缓、甚至停止生长。消肾方给药组症状缓解,高剂量组缓解最明显。<br>  2大鼠Ucr:模型组大鼠Ucr显著降低,与之相比,消肾方高、中剂量给药组大鼠Ucr明显升高。<br>  3肾脏系数:模型组大鼠肾脏系数明显增大,与之相比,消肾方给药组大鼠肾脏系数明显减小,高剂量组最为明显。<br>  4血液相关指标:与空白组相比,模型组大鼠的GLU、GHB、TG、CHOL均明显升高;与模型组相比,消肾方给药组大鼠GLU、GHB、TG、CHOL均有效降低,高剂量组效果最明显。<br>  5ERS相关蛋白:与空白组相比,模型组大鼠肾组织中的GRP-78、ATF6、CHOP明显升高。与模型组相比,消肾方高剂量组大鼠肾组织中的GRP-78、ATF6、CHOP有效降低,消肾方高剂量组降低最明显。<br>  结论:<br>  1消肾方为治疗DKD的有效方剂,可改善DKD大鼠一般情况、降低肾脏系数、有效调节糖脂代谢、降低ERS相关蛋白的表达、保护肾功能,从而延缓DKD进展。<br>  2在DKD的进展中,ERS诱导的系膜细胞凋亡着重要作用,GRP-78、ATF6、CHOP等蛋白参与这一过程。<br>  3消肾方治疗DKD的作用机制可能是通过降低GRP-78、ATF6、CHOP等ERS相关蛋白的表达水平来抑制DKD大鼠肾脏系膜细胞凋亡所实现。<br>  由此可推断消肾方能通过抑制内质网应激介导的系膜细胞凋亡,其实是通过调控ATF6-CHOP-PUMA信号通路相关蛋白的表达实现的。

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