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摘要目的:<br>　　通过构建肝纤维化小鼠，观察CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型形成过程中FBLN5的变化。研究FBLN5在人肝星状细胞（LX-2）活化后表达的变化，探讨FBLN5在肝纤维化中的作用及机制。<br>　　方法：<br>　　1.生物信息学分析：在GEO数据库中选择符合要求的基因芯片数据集，使用limma包识别差异表达基因，得到差异基因相关数据。进行PPI网络分析并寻找与其他基因连接最多的差异基因，并使用Cytoscape构建蛋白互作网络并找出关键基因。此外，使用CTD数据库对挑选出的基因进行通路富集分析，初步分析基因可能参与的生物学过程或者信号通路。<br>　　2.将40只雄性C57BL/6小鼠随机分2组：对照组（n=20）、模型组（n=20）。在适应性喂养一周后开始造模。模型组每周腹腔注射20%CCl4溶液（橄榄油溶剂，2.5ml/kg），对照组小鼠给予腹腔注射橄榄油（2.5ml/kg），每周注射两次，持续注射8周。在造模期间给予小鼠足量饲料，各笼小鼠自由饮水；末次注射完成后对所有小鼠进行安乐死，并收集小鼠的肝组织及外周血标本。HE染色观察肝组织病理学改变，检测外周血血清中小鼠ALT和AST血清学水平。WB检测小鼠肝组织中FBLN5、GAPDH、α-SMA表达情况。<br>　　3.使用CCK-8检测肝星状细胞增殖情况，改变FBLN5表达水平后，肝星状细胞增殖情况变化。<br>　　3.使用Lipofectamine2000转染改变人肝星状细胞活化后的FBLN5表达水平。抑制实验LX-2细胞分4组:空白对照组、TGF-β1组（5ng/ml）、NC组（5ng/mlTGF-β1+siRNA-NC）、siRNA-FBLN5组（5ng/mlTGF-β1+siRNA-FBLN5）。过表达实验LX-2细胞分4组:空白对照组、TGF-β1组（5ng/ml）、pEX组（5ng/mlTGF-β1+pEX）、pEXRNA-FBLN5组（5ng/mlTGF-β1+pEX-FBLN5）。转染完成后在37℃培养箱48h后检测FBLN5、α-SMA、GAPDH、CollagenI在肝星状细胞中的mRNA表达水平。72h后提取细胞蛋白，WesternBlotting分析FBLN5、α-SMA、GAPDH在肝星状细胞中的表达水平。<br>　　4.细胞免疫荧光染色法检测5ng/mlTGF-β1诱导的LX-2细胞FBLN5、α-SMA、CollagenI蛋白细胞内定位表达。<br>　　5.统计分析:使用GraphPadPrism8进行数据绘图。所有统计分析均使用IBMSPSSStatistics25软件。所有数据均以平均值±标准差（SD）表示。符合正态分布且方差齐性的两组计量资料之间比较采用t检验，两两之间比较使用方差分析法。P值lt;0.05提示差异具有统计学意义。<br>　　结果：<br>　　1.生物信息学分析：在乙肝肝纤维化作用机制的研究中，经过对基因表达谱GEO数据集的分析，筛选出10个最关键的基因（AQP1、IGFBP7、FBLN5、DPT、LUM、AEBP1、EFEMP1、DKK3、COL4A1、COL4A2）。对挑选出的FBLN5进行通路富集分析结果显示，FBLN5主要与弹性纤维的形成及细胞外基质的组成有关。<br>　　2.小鼠HE染色：正常对照组小鼠肝细胞排列整齐，无炎性细胞浸润，肝小叶结构相对完整；模型组小鼠肝小叶有明显的结构破坏，细胞间有炎性细胞浸润。模型组的ALT、AST指标均高于对照组。<br>　　3.CCK-8检测LX-2增殖情况结果显示：抑制FBLN5表达后，LX-2增殖活性变高，结果具有统计学意义（plt;0.05）；过表达FBLN5后，LX-2增殖能力受到抑制，结果具有统计学意义（plt;0.05）。<br>　　4.Western-Blot结果显示TGF-β1可以诱导LX-2细胞α-SMA表达增加；抑制FBLN5表达后，TGF-β1诱导的α-SMA蛋白被显著逆转；过表达FBLN5后，受TGF-β1活化的LX-2细胞α-SMA蛋白表达水平进一步升高。而同时p-ERK表达水平同FBLN5呈正相关。差异具有统计学意义（plt;0.05）。<br>　　5.小鼠肝纤维化模型建立成功，使用Western-Blot技术检测小鼠α-SMA、FBLN5、CollagenI、ERK1/2、p-ERK1/2表达，与正常组相比，模型组的α-SMA、FBLN5、CollagenI、p-ERK1/2表达明显升高，结果具有统计学意义（plt;0.05）。<br>　　6.细胞免疫荧光染色：没有TGF-β1刺激时，FBLN5、α-SMA和CollagenI在肝星状细胞内表达很弱。FBLN5在肝星状细胞的细胞质内和细胞核内均有表达，主要在细胞核内表达。TGF-β1可以诱导FBLN5、CollagenI及α-SMA在LX-2细胞的表达增加。抑制FBLN5的表达可以减轻TGF-β1对LX-2细胞的活化，使LX-2细胞的CollagenI及α-SMA表达降低。<br>　　结论：<br>　　1.肝纤维化小鼠肝组织FBLN5、α-SMA、CollagenI的表达水平升高。FBLN5、α-SMA、CollagenI可能共同参与肝纤维化的发生过程。<br>　　2.FBLN5对肝星状细胞的增殖有抑制作用。<br>　　3.FBLN5在肝星状细胞的细胞核及细胞质中均有表达，主要表达在细胞核内。TGF-β1可以使肝星状细胞的FBLN5表达升高。<br>　　4.下调FBLN5基因的表达会抑制由TGF-β1诱导的肝星状细胞的活化，降低α-SMA蛋白的表达，而过表达FBLN5则会促进这过程。p-ERK表达水平同FBLN5呈正相关。FBLN5通过TGF-β1/FBLN5/ERK信号途径促进肝纤维化。