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摘要研究背景及目的：<br>　　胆汁淤积是损害儿童健康的常见肝脏疾病，病因复杂，病情多变，严重时，可对婴幼儿产生巨大伤害或导致死亡，探索改善胆汁淤积性损伤的方法仍是目前面临的一项重要挑战。本研究目的在于研究胆汁淤积肝细胞线粒体的状态，探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）通过SIRT1/PGC-1α/TFAM通路对胆汁淤积的调节作用，评价新型纳米复合物NGO-NAD对胆汁淤积模型小鼠肝脏保护的作用，探索保护线粒体功能、促进肝损伤修复的方法，为治愈胆汁淤积患儿提供新的思路。<br>　　实验方法：<br>　　1.调查儿童胆汁淤积临床数据，选择符合研究标准的病例23例进行统计学分析；<br>　　2.用甘氨鹅脱氧胆酸（GCDCA）诱导产生胆汁淤积LO2细胞模型，用3,5-二乙酯基-1,4-二氢三甲砒啶（DDC）诱导小鼠胆汁淤积动物模型；<br>　　3.使用RT-qPCR、WesternBlot法检测分析患儿肝脏细胞中SIRT1、PGC-1α、TFAM的表达水平和mtDNA拷贝数；<br>　　4.使用NAD/NADH检测试剂盒测定患儿胆汁淤积组织或模型组细胞的NAD含量；<br>　　5.HE染色和免疫组化染色检测肝组织病理改变；<br>　　6.CCK-8检测法检测NAD干预处理后实验组LO2细胞活力；<br>　　7.Bradford蛋白含量检测胆汁淤积及加药NAD处理后线粒体蛋白含量变化；<br>　　8.JC-I线粒体膜检测试剂盒检测胆汁淤积及加药NAD处理后的线粒体膜电位变化；<br>　　9.免疫组化法定位SIRT1在肝细胞中的表达;<br>　　10.用新型纳米材料NGO装载药物NAD，研究新药NGO-NAD对肝细胞损伤的修复作用。<br>　　结果：<br>　　1.胆汁淤积患儿肝细胞线粒体氧化损伤明显，SIRT1、TFAM和PGC-1α表达水平下降，线粒体DNA拷贝数下降，NAD含量减少。<br>　　2.NAD处理过的GCDCA致胆汁淤积LO2细胞，NAD处理过的GCDCA致胆汁淤积LO2细胞，SIRT1/TFAM蛋白表达和mtDNA拷贝数均上升，其细胞活力、线粒体膜电位和线粒体总蛋白含量得到适当恢复。<br>　　3.本研究中实验组小鼠胆汁淤积造成的肝损伤，在NAD药物处理后，包括小鼠体重、肝功能和病理形态改变等均显著缓解。<br>　　4.使用了SIRT1抑制剂的实验组中，NAD对胆汁淤积的调节作用丧失，NAD依赖SIRT1/PGC-1α/TFAM通路，改善胆汁酸暴露所引起的线粒体DNA损伤。<br>　　5.为提高NAD的生物利用度和靶向性，将NAD通过装载聚乙二醇（PEG）修饰的纳米石墨烯（NGO）后形成的NGO-NAD，比较单纯使用NAD组，对胆汁淤积肝细胞的保护作用效果更为明显。<br>　　结论：<br>　　NAD通过SIRT1/TFAM/mtDNA通路调节肝细胞线粒体功能，改善胆汁淤积。通过纳米石墨烯的装载后，使NAD的生物利用度和靶向性增高，改善胆汁淤积的效果优于单纯使用NAD。