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摘要实验目的：提取分离纯化短管兔耳草多糖，解析其结构，并探究其抗肿瘤活性，建立多糖结构与其抗肿瘤活性的构效关系，并初步探讨其作用机制。<br>　　实验方法：<br>　　（1）采用水提醇沉的方法得到粗多糖，并通过DEAE-纤维素分离纯化得到2个部位LBMP-1和LBMP-2。<br>　　（2）测定LBMP-2化学成分，分子量，单糖组成，通过红外光谱、核磁共振、原子力显微镜、扫描电镜、透射电镜分析LBMP-2结构。<br>　　（3）通过DPPH，ABTS，还原性实验测定LBMP-2的体外抗氧化活性。<br>　　（4）通过MTT法测定LBMP-2对B16-F10细胞增殖的影响，通过细胞能量代谢仪Seahorse测定LBMP-2对B16-F10细胞能量代谢的影响。<br>　　（5）建立动物荷瘤模型：将细胞密度为4×105个/mL的B16-F10细胞悬液皮下注射0.1mL到小鼠左前肢背部，随机分组4天后腹腔注射CTX(20mg/kg)，NS(10mL/kg)，高剂量LBMP-2(30mg/kg)，低剂量LBMP-2(15mg/kg)，连续注射11天后，在第12天取材。HE染色检测瘤体和脾的组织病理变化，免疫组化检测黑色素瘤中AMPK的表达水平、脾CD3+、CD4+、CD8+的表达水平。<br>　　实验结果：<br>　　（1）经过化学成分检测，分离纯化得到LBMP-2不含多酚和蛋白质，其得率为1.62±0.43%，其中总糖含量为18.95±1.3%，糖醛酸含量为67.6±0.32%。<br>　　（2）HPGPC法测得LBMP-2的分子量为23.799kDa，Mw/Mn＝1。表明LBMP-2是分子量均一体系多糖。IC法确定LBMP-2由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸组成，其摩尔比为0.156:0.144:0.107:0.114:0.480。IR法和NMR法确定LBMP-2是α-吡喃糖苷构型。AFM结果显示LBMP-2有一个支链，其主链长度约为398nm，宽度约为15nm，最高处为224pm，支链长度约为70nm。SEM结果显示LBMP-2是松多孔的片状结构，且拥有高支化结构。TEM结果则提示LBMP-2在水溶液中容易聚集可能与多糖链的自组装过程有关。<br>　　（3）体外抗氧化结果显示LBPM-2在体外有良好抗氧化活性。<br>　　（4）MTT法结果显示LBPM-2在体外抑制B16-F10细胞的增殖，Seahorse结果显示LBPM-2在体外抑制B16-F10细胞的能量代谢。<br>　　（5）动物荷瘤实验结果表明LBPM-2可抑制体内肿瘤的生长，升高脾指数，下调黑色素瘤中AMPK蛋白的表达，下调脾中CD4+，CD8+的表达，上调CD3+的表达。<br>　　实验结论：<br>　　短管兔耳草成功分离出两个部位多糖LBMP-1和LBMP-2。LBPM-2是一个分子量为23.8kDa的均一体系多糖，属于α-吡喃糖苷构型，由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸5种单糖构成，半乳糖醛酸是其主要单糖。LBPM-2在体外有良好的抗氧化活性和抗B16-F10细胞增殖活性。LBPM-2在体内可抑制黑色素瘤的生长，其机制可能是通过调节免疫功能，同时下调黑色素瘤中AMPK的表达，抑制肿瘤细胞能量代谢。这些药理活性可能与单糖组成和空间结构有关。