摘要目的:<br> 观察Ang-(1-7)对高糖应激下MIN6细胞内质网应激及β细胞去分化的影响,并初步探讨Ang-(1-7)发挥作用的可能信号通路。<br> 方法:<br> 将小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞传代培养,随机分为正常对照组、高糖组、高糖+Ang-(1-7)组、高糖+Ang-(1-7)+A779组、高糖+Ang-(1-7)+LY294002组。培养48h后,免疫荧光法检测胰岛β细胞特异标记物Pdx1、MafA以及内分泌祖细胞特异标记物Oct4、Nanog的基因表达水平;同时检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)表达量及表达位置的变化情况。Westernblot法检测PI3K/Akt/GRP78通路相关蛋白Akt、p-Akt的表达水平。<br> 结果:<br> 在共聚焦显微镜下观察各组细胞。高糖可降低β细胞特异表面标志物Pdx1和MafA、增加内分泌祖细胞标志物Oct4和Nanog的表达(P=0.000、0.001、0.000、0.000),使MIN6细胞发生病理性去分化,上述改变可被Ang-(1-7)部分逆转(P=0.006、0.029、0.000、0.000),但Ang-(1-7)的效应经过A779和LY294002干预后上述基因表达变化情况可被部分消除。NG组细胞GRP78蛋白主要表达于细胞质中,表达量极高,在高糖(33.3mmol/L)干预MIN6细胞48h后,其被大量诱导并转位于细胞核且表达量增加(P=0.000),Ang-(1-7)干预后细胞GRP78蛋白胞质胞核比值明显升高(P=0.000),与NG组相比,差异无统计学意义(P=0.196),加入抑制剂A779和LY294002干预后,抑制了GRP78蛋白向细胞质移位,胞质胞核比值明显降低,差异均有统计学意义。此外,高糖毒性抑制p-Akt蛋白在细胞中的表达(P=0.000),Ang-(1-7)干预后使p-Akt活性增强,表达量增加(P=0.000),而经A779和LY294002干预可使Ang-(1-7)介导的Akt磷酸化作用被抑制(P=0.000)。<br> 结论:<br> Ang-(1-7)可能通过激活PI3K/Akt从而抑制GRP78信号蛋白减弱高糖毒性刺激的的MIN6细胞去分化及内质网应激。<br> 本课题为山西省自然科学基金“血管紧张素(1-7)对高糖应力下胰岛β细胞病理性去分化的影响及机制研究(编号:201901D111374)”。
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