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摘要目的：<br>　　狼疮性肾炎（LN）是系统性红斑狼疮（SLE）累及肾脏所引起的一种免疫复合物型肾炎，是SLE诱发死亡及终末期肾病（ESRD）的主要原因之一。早期诊断、有效治疗、减少复发是延缓LN进入ESRD的重要手段。肾活检是确诊和判断LN分型、活动性的金标准，但有创性操作，不易重复。因此，尚需一些能早期正确监测肾脏受损程度、有效反映组织学分型、疾病活动性、判断疗效和预后，且易于检测的临床指标，如血液、尿液生物标志物。<br>　　肾小球血管内皮细胞损伤和修复失衡，引起严重的炎症及免疫反应，是诱发LN的重要机制之一。血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）是介导血管内皮细胞参与炎症及免疫反应的一个重要分子，且其在免疫介导的肾脏疾病发病机制中发挥重要作用；本课题通过生物信息学分析发现，VCAM-1是鉴别LN患者与正常移植供体者的最显著指标之一，且有研究提示：人尿液VCAM-1可作为LN的潜在生物标志物；然而，现有研究未对肾脏活检组织、尿液及血液样本同时进行检测，无法确定生物标记物VCAM-1与肾脏病理特征之间的关系。<br>　　因此，本课题将通过以下两方面研究LN患者血液或尿液中VCAM-1表达与其临床、病理特征之间的关系。<br>　　1．检测VCAM-1在LN患者肾脏组织、血清及尿液中的表达及诊断价值；<br>　　2．分析LN患者肾脏组织、血清及尿液中VCAM-1的表达与其临床和病理特征性指标的关系。<br>　　该研究以期为临床应用尿液或血液VCAM-1指导LN诊断、治疗及预后判断提供理论和实验依据。<br>　　方法：<br>　　1.检测LN患者中VCAM-1的表达及诊断价值<br>　　1）通过生物信息学筛选分析与LN高度相关性差异基因表达：利用GEO数据库（GSE32591）基因表达谱数据集（共94个样本：包含32例LN肾小球、肾小管，和15例肾移植供体的肾小球、肾小管），通过网络交互工具GEO2R进行筛选（P值＜0.05及│logFC≥1│作为节段值的标准），蛋白质检索工具（STRING）分析蛋白质间的相互作用（PPI），将PPI网络分析的基因使用Cytiscape3.7.0的插件cytohubba0.1中MCC分析，从中挑选最具有差异性的前30个基因，并把PPI数据用其MCODE5.1插件筛选功能模块。<br>　　2）研究对象：①LN患者：在我院行肾脏穿刺活检，依据2018版ISN/RPS诊断为LN病例43例及临床诊断为LN病例14例；②非LN患者：我院的肾脏标本包括正常肾脏（癌旁肾脏组织）、微小病变性肾小球病各两例，均排除合并其他慢性肾炎；抽取在本院行体格检查的健康人群，收集血清及尿液各5例。<br>　　3）病理学方法：EnVision二步法免疫组织化学及PAS套染方法：观察VCAM-1在肾脏中的表达及定位；<br>　　4）ELISA方法检测LN与健康人血清及尿液中VCAM-1的表达水平。<br>　　2.分析LN患者中VCAM-1表达与临床病理特征性指标的关系<br>　　1）临床资料：①一般资料包括：年龄、性别，从首次发现SLE到活检时间、其他伴随症状（如胸膜炎、光过敏、干燥综合征等）；②实验室指标：抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（anti-dsDNA）、血红蛋白、血清总蛋白、血清白蛋白、24小时尿蛋白定量、补体C3、补体C4、尿素氮、血清肌酐、血尿素、β2微球蛋白、α1微球蛋白、外周抗中性粒细胞胞浆抗体（p-ANCA）、中心抗中性粒细胞胞浆抗体（c-ANCA）。<br>　　2）病理学方法：①常规HE及特殊染色方法包括：HE、PAS、PASM、MASSON染色，光镜下观察肾脏病理形态及分型；②免疫荧光方法：检测IgA、IgM、IgG、C3、C1q；③电镜：观察LN肾脏组织超微结构，包括免疫复合物沉积部位及程度，足细胞损伤情况。<br>　　3）统计学分析方法：应用SPSS22.0软件进行统计学数据分析。计量资料采用均数±标准差（?X±S）进行统计描述，采用独立样本t检验分析进行组间差异分析比较，采用Pearson相关检验进行变量的相关性分析，计数资料采用率及频数表示，采用X2检验进行组间率的比较；Plt;0.05表示差异具有统计学意义。<br>　　结果：<br>　　1.LN患者中VCAM-1的表达情况及诊断价值<br>　　1）生物信息学分析结果提示：VCAM-1是LN患者与正常移植供体者间最有差异表达的基因之一。<br>　　2）一般情况：我院肾脏中心在1993年1月至2021年12月期间，行肾脏穿刺活检病例共11882例，在继发性肾脏疾病中确诊LN患者占21.83%（203例），其中女性占88.67%（185例），男性占11.33%（23例），年龄中位数是37.5±11.2岁。<br>　　3）不同肾脏疾病的肾脏组织中VCAM-1的表达情况<br>　　①VCAM-1在正常肾脏组织及微小病变性肾小球病中不表达，而在LN中主要表达在肾小球囊壁层上皮细胞、新月体肾小球内增生的细胞以及肾小管上皮细胞的细胞膜中。<br>　　②在43例LN肾脏组织中，VCAM-1阳性率46.51%（20例），VCAM-1阴性率53.49%（23例）。<br>　　4）LN患者血清及尿液中VCAM-1的表达情况<br>　　LN患者的血清及尿液VCAM-1表达均明显高于健康人群，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　2.分析LN患者中VCAM-1表达与临床及病理特征的关系<br>　　1）LN患者肾脏组织中VCAM-1表达与临床和病理特征性检测指标的关系<br>　　①LN患者肾脏组织中VCAM-1的表达情况与临床表现的关系<br>　　肾组织中VCAM-1阳性患者平均年龄是35.8岁，男女比例为1：4。肾脏组织中VCAM-1阳性组与阴性组之间，在临床表现中胸膜炎、脱发、光过敏、高血压的差异有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　②LN患者肾脏组织中VCAM-1表达情况与实验室指标的关系<br>　　肾脏组织中VCAM-1阳性组较阴性组相比，肾损伤相关的生化指标如尿酸、肌酐明显升高；两组间在肾损伤中的尿蛋白定性、血清总蛋白及血红蛋白、尿酸、β2微球蛋白的差异有统计学（P＜0.05）；在实验室指标中的血肌酐、24h尿蛋白定量、α1微球蛋白、血清白蛋白及诊断SLE相关的实验室指标ANA、抗dsDNA、ANCA的差异无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　③LN患者肾脏组织中VCAM-1表达情况与病理特征的关系<br>　　依据2018年ISR修订的病理分型中，II型1例，III型4例，IV型27例，V型11例；VCAM-1阳性组与阴性组在LN分型的差异无明显统计学意义（P＞0.05）。VCAM-1阳性组与阴性组之间，在LN病理诊断的分型、CI、细胞新月体的差异无统计学意义（P＞0.05），与细胞纤维新月体、AI及AI评分中新月体比例的差异有统计学意义（P＜0.05），尤其两组间的AI差异有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　2）LN患者血清中VCAM-1表达与临床和病理特征性检测指标的相关性<br>　　LN患者血清VCAM-1水平与实验室指标补体C4呈正相关性，有统计学意义（P＜0.05），与临床表现的疾病发病时长，实验室指标24h尿蛋白、血肌酐、血清白蛋白、补体C3、抗dsDNA、ANA以及肾脏病理的AI、CI无明显相关性（P＞0.05）。<br>　　3）LN患者尿液中VCAM-1表达与临床和病理特征性检测指标的相关性<br>　　LN患者尿液中VCAM-1水平与实验室指标ANA指标呈正相关性，有统计学意义（P＜0.05），与临床表现中疾病发病时长，实验室指标的抗dsDNA、24h尿蛋白、血肌酐、血清白蛋白、补体C3、C4以及肾脏病理的AI、CI无明显相关性（P＞0.05）。<br>　　4）LN患者血清、尿液及肾脏组织中VCAM-1表达与临床病理联系<br>　　分析8例LN患者VCAM-1在血清、尿液及肾脏组织中的表达与临床及病理联系，其中有2例LN患者血清、尿液及肾脏组织中VCAM-1均高表达，都为男性，临床首次以肾脏受累为主要表现，抗dsDNA、ANA、补体C3、C4均符合临床诊断SLE的初筛及诊断标准，经活检穿刺病理诊断均为IV型，且AI评分高。<br>　　5）血清及尿液中VCAM-1在狼疮性肾炎诊断中的价值<br>　　血清及尿液中VCAM-1在诊断LN的曲线下面积分别为0.87、0.98（P＜0.01）。<br>　　结论：<br>　　1.LN患者肾脏组织、血清及尿液中VCAM-1表达均增高，其组织中的表达与新月体形成有关。<br>　　2.LN患者肾脏组织、血清及尿液中VCAM-1表达分别与其病理AI、C4及ANA表达相关，其表达对LN诊断、治疗及预后判断有一定的指导意义。