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摘要目前关于费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病（Philadelphiachromosomepositiveacutelymphoblasticleukemia,Ph+ALL）的治疗还需要不断的进行探索，已有的酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosinekinaseinhibitors,TKIs）在治疗Ph+ALL时的作用时间比较短暂，而且会出现耐药性，因此我们需要找到能够增加TKIs活性的药物。B细胞淋巴瘤因子-2（Bcelllymphoma2,BCL-2）在大多数血液肿瘤（包括Ph+ALL）中高表达，因为其具有抗凋亡的作用，所以能够诱导肿瘤的发生。维奈托克（Venetoclax,VEN）作为一种特异性的BCL-2抑制剂，因此在治疗血液肿瘤时能够起到很好的作用，已经被证实在慢性髓系白血病（chronicmyelocyticleukemia，CML）、急性髓系白血病（Acutemyeloidleukemia,AML）、套细胞淋巴瘤（mantlecelllymphoma,MCL）中能够取得很好的治疗效果，且已证实与TKIs联用可起协同作用，但该药针对急性淋巴细胞白血病(Acutelymphoblasticleukemia,ALL)的相关研究较少，尤其针对Ph+ALL。本论文主要就维奈托克与达沙替尼联用在Ph+ALL细胞株中的效果及其相关机制进行探讨。<br>　　目的：<br>　　探讨BCL-2抑制剂-维奈托克（VEN）、酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）达沙替尼（Dasatinib,DAS）单独去使用以及对两药进行联合使用，观察其对SUPB15细胞的增殖情况与凋亡反应及其相关机制。<br>　　方法：<br>　　（1）96孔板进行体外培养的SUPB15细胞经VEN（VEN单药组）、DAS（DAS单药组）、两药联合（DAS+VEN联合用药组），进行干预，并设置不加药阴性对照组，每组设置6个重复孔，观察SUPB15细胞株24h、48h、72h，使用CCK8法测定细胞增殖抑制率。<br>　　（2）采用流式细胞术(FCM)在48h时间节点检测DAS组、VEN组及两药联合组的凋亡情况。<br>　　（3）Q-PCR检测DAS单药组、VEN单药组及两药联合作用干预SUPB15细胞株后，相关基因BCR-ABLmRNA、BCL-2mRNA、MCL-1mRNA、LYNmRNA、BIMmRNA、STAT5mRNA、BAXmRNA表达。<br>　　（4）采用蛋白质检测法(Western-blot)分析DAS单药组、VEN单药组及两药联合使用组对SUPB15细胞株干预后，相关蛋白BCL-2、MCL-1、STAT5、BAX、BIM、LYN蛋白的表达情况以及检测凋亡相关的标志性蛋白Cleaved-Caspase-3(CC-3)的水平。<br>　　结果：<br>　　（1）CCK-8结果表明：在24h、48h、72h三个时间节点，VEN单药组（0.05μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L），DAS单药组（0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）。伴随着时间延长以及浓度的增加，利用酶标仪检测到的吸光值越来越低，说明药物作用于细胞之后，细胞的存活率降低，药物对细胞的抑制率升高，且呈时间-剂量依赖性，单药作用组与联合作用组与对照组比较差异均具有统计学意义。DAS单药组在各时间点（24h、48h、72h）的IC50值分别为0.13μmol/L、0.08μmol/L、0.01μmol/L，VEN单药组在各时间点（24h、48h、72h）的IC50值分别为：1.24μmol/L、0.39μmol/L、0.07μmol/L。计算在48hVEN联合DAS（0.5μmol/L+0.1μmol/L）的q值为1.16，q值＞1.15，表明两药具有协同或增敏作用。<br>　　（2）FCM结果表明：根据CCK8实验结果，选用48h时间节点，选接近IC50值的联合组研究浓度，即：DAS0.1μmol/L、VEN0.5μmol/L及两药联合。流式仪检测细胞凋亡率，联合用药组的平均凋亡率（57.42±0.59）%，显著高于对照组，亦高于各单药组（p＜0.05），差异具有统计学意义。<br>　　（3）Q-PCR结果表明：当DAS单药组浓度为0.1μmol/L、VEN单药组浓度为0.5μmol/L及联合组浓度为0.1μmol/LDAS+0.5μmol/LVEN时，干预SUPB15细胞株48h后，相关基因BCR-ABL、LYN、STAT5、BCL-2、MCL-1mRNA的相对表达量较对照组下降（P值＜0.05，差异具有统计学意义），而BIM、BAXmRNA的相对表达量较对照组上升，联合用药组与单药组比较BCR-ABL、LYN、STAT5、BCL-2、MCL-1mRNA的下降量及BIM、BAXmRNA的上升量更明显，差异具有统计学意义（p＜0.05）。<br>　　（4）Western-blot结果表明：单药组（0.1μmol/LDAS、0.5μmol/LVEN）及联合组（0.1μmol/LDAS+0.5μmol/LVEN）干预SUP15细胞株48h，与对照组比较，LYN、BCL-2、MCL-1、STAT5蛋白的表达量下降，而BAX、BIM以及CC-3表达增加，联合用药组的LYN、MCL-1、BCL-2蛋白与单药组相比显著下降（P＜0.05）；联合用药组中STAT5的表达较VEN单药组明显下降，与DAS单药组比较虽无统计学意义（P＞0.05），但具有一定下降趋势；与对照组相比，BAX蛋白、BIM蛋白以及CC-3的表达在各实验组中均明显升高（P＜0.05，差异有统计学意义），联合用药组的BAX的表达与各单药组比较有显著差异（P＜0.05），联合组BIM的表达虽不具统计学差异（P＞0.05），但是具有一定的增加趋势。<br>　　结论：<br>　　（1）VEN、DAS单药对SUPB15细胞株均有增殖抑制作用，并呈时间剂量依赖性；<br>　　（2）VEN、DAS单药对SUPB15细胞株均有促凋亡作用；<br>　　（3）VEN与DAS联用干预SUP15细胞株具有协同抑制作用作用和促进凋亡，可能的机制为DAS可以下调MCL-1的表达，上调BAX、BIM，从而增强VEN的作用效果。