检索历史 清除

摘要背景:<br>　　慢性鼻-鼻窦炎（chronicrhinosinusitis,CRS）是最常见的难治性慢性疾病之一，主要表现为鼻塞、流涕、头痛、嗅觉障碍等，由于其异质性强、发病机制复杂，目前的治疗方法仍无法达到非常理想的效果。中医及中药相关研究普遍认为薄荷在过敏性鼻炎、慢性鼻窦炎等炎症性呼吸道疾病中具有潜在的治疗价值，临床中也有大量CRS患者于门诊要求复方薄荷脑滴鼻液以缓解鼻塞、头晕头痛等症状，但是尚无薄荷醇及其受体TRPM8在CRS治疗中作用机制的研究。呼吸道上皮细胞的生物学可发挥连接先天性和适应性气道黏膜免疫之间的“桥梁”作用。我们发现薄荷醇受体TRPM8在CRS患者鼻黏膜上皮中有高表达，但是薄荷醇及其受体TRPM8在CRS的发生发展过程中的作用尚未有明确的研究。<br>　　目的:<br>　　本研究将探究薄荷醇刺激TRPM8对上皮细胞功能的影响，以及薄荷醇刺激TRPM8在CRS疾病发生发展中的作用，以期对CRS的治疗和防控提供新的思路。<br>　　方法:<br>　　1.临床相关性研究：对正常人群和CRS患者使用复方薄荷脑滴鼻液，①对CRS患者进行SNOT-22量表评价疾病严重程度，确定患者主要的症状。②检测使用前后正常人群和CRS患者鼻阻力的变化，④比较使用前后正常人群和CRS患者VAS鼻腔通畅度的影响，③通过CT重建鼻腔容积模型比较CRS患者使用前后鼻腔容积变化，⑤对比使用前后正常人群和CRS患者情感维度的变化。<br>　　2.细胞学分析TRPM8与CRS的相关性：①收集临床样本，分析CRS患者中鼻黏膜中TRPM8的表达水平和高表达部位，分析TRPM8相对定量与CRS严重程度之间的相关性。②细胞实验：使用薄荷醇以及NF-κB通路抑制剂处理人鼻黏膜上皮细胞（细胞系），实时荧光定量PCR检测TRPM8、IL-33和TSLP的转录水平，WB检测NF-κB磷酸化p65蛋白表达水平。<br>　　3.动物模型分析：①建立小鼠模型，共三组，A组为NS滴鼻，B组为OVA造模CRS，C组在B组的基础上同步薄荷醇滴鼻；②记录、分析各组小鼠CRS的挠鼻、喷嚏的行为学表现；③小鼠模型的鼻-鼻窦腔CT情况及黏膜HE染色比较炎症程度；④ELISA检测鼻黏膜中TRPM8的表达水平以及上皮来源细胞因子IL33和TSLP的表达水平；⑤通过旷场试验检测CRS小鼠使用薄荷醇滴鼻前后自发活动度的变化。<br>　　结果:<br>　　1.CRS患者进行SNOT-22评分显示最严重的症状为鼻塞；正常人群和CRS患者在干预后较干预前鼻阻力增加，CRS患者干预后5分钟较干预后1分钟鼻阻力更大；VAS量表显示两组人群干预后较干预前主观鼻腔通畅度均增加，CRS患者VAS通畅度增加得更明显；CT重建CRS患者鼻腔空间显示，使用复方薄荷脑滴鼻液后鼻腔空间较前明显缩小；两组人群干预后较干预前情感维度均有一定程度的改善。<br>　　2.与正常对照组人群相比较，CRS患者鼻黏膜中TRPM8表达量显著升高，并且CRS患者上皮细胞中的TRPM8表达量明显高于对照组。CRS患者SNOT评分与鼻粘膜TRPM8蛋白水平呈正相关。人鼻黏膜上皮细胞在薄荷醇刺激后，可以使TRPM8、IL-33及TSLP的mRNA转录水平升高，并且浓度越高、刺激时间越长效果越明显；在薄荷醇刺激后，NF-κB通路磷酸化p65蛋白表达量水平明显增加，使用NF-κB通路抑制剂后这种效应减弱。<br>　　3.三组小鼠挠鼻和打喷嚏症状的频率为C组最重、B组次之、A组基本无症状；小鼠鼻-鼻窦CT显示三组小鼠的鼻黏膜肿胀程度C组最重、B组次之；HE染色提示三组小鼠鼻黏膜炎症程度C组最重、B组次之；小鼠鼻黏膜组织TRPM8表达水平C组最高、B组次之；鼻腔灌洗液中IL-33和TSLP的表达水平表达C组最高，B组次之；旷场试验提示CRS小鼠在使用薄荷脑刺激后自发活动时间和距离明显增加。<br>　　结论:<br>　　使用复方薄荷脑滴鼻液会使CRS患者的鼻腔阻力增大、鼻腔鼻窦空间减小，但是鼻腔通畅度主观感觉增加，这种主观通畅感可能是一种神经感受的“假象”或情绪改善的结果；薄荷醇刺激HNECs的TRPM8可激活NF-κB通路，并进一步提高IL-33和TSLP的表达；在CRS小鼠模型中，同步滴加薄荷醇可以加重鼻黏膜炎症程度，并且增加鼻腔灌洗液中TSLP和IL-33水平，薄荷醇可能是通过刺激三叉神经改善CRS小鼠的情绪的。CRS患者使用薄荷脑滴鼻液有加重疾病的风险。