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摘要背景和目的：<br>　　BET抑制剂，是免疫检查点PD-1/PD-L1抑制剂之后，又一种极具潜力的广谱抗癌药物，依据的是表观遗传机制治疗肿瘤的新策略、新方法。研究表明，BET抑制剂在恶性肿瘤、炎症等多种疾病模型中，均展示出了良好的治疗效果，具有极大的研究价值和临床意义。目前，尚无可供临床应用的BET抑制剂。临床试验观察显示：BET抑制剂对血液肿瘤治疗表现尚好，但是在实体瘤治疗上有着相当大的局限性。一个可能的原因是，现有的多数BET抑制剂为基于JQ-1结构改造的化合物，其递送到实体组织的能力有限，因此表现出毒性高、活性差和组织渗透力低的特点。百时美施贵宝公司设计的BMS-986158，对广泛的癌症类型均表现出良好的抗增殖活性，作为新一代BET抑制剂，其核心结构与JQ-1不同。我们在课题组前期工作基础上，基于对BMS-986158结构改造的化合物库及相应的计算机模拟筛选结果，拟合成相应的咔啉衍生物，测定其对Bromodomain靶点的活性抑制作用，筛选出活性较好的化合物，并完成进一步的毒性评价，探查其对异种移植实体瘤模型的治疗效果，以期得到一种有效低毒的BET抑制剂。<br>　　方法：<br>　　（1）化合物的合成：苯并含氮杂环衍生物首先与2,5?二溴?3?硝基吡啶偶联，接着通过有机磷试剂还原硝基成环，形成咔啉结构，再与(R)-苯基(四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇发生取代反应，最后通过偶联反应将1,4-二甲基-1H-1,2,3-三唑引入，得到目标产物。<br>　　（2）Bromodomain靶点蛋白抑制作用检测：首先通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）方法检测所合成化合物对主要靶点蛋白BRD4的抑制活性，筛选得到化合物NHWD-930。接着以AZD5153，I-BRD9，Bromosporine或CPB30作为阳性对照化合物，检测化合物NHWD-930与多种Bromodomain靶点蛋白的结合效果。<br>　　（3）体外抗肿瘤活性研究：通过细胞增殖抑制实验，在NCI-H211和MDA-MB231细胞中，比较化合物NHWD-930和JQ-1、BMS986158的细胞增殖抑制能力。通过细胞集落形成试验，在A2780、H526和MDA-MB231细胞中，比较化合物NHWD-930和JQ-1的细胞增殖抑制能力。<br>　　（4）抗肿瘤机制研究：通过蛋白免疫印迹实验，检验BRD4和c-MYC的表达。<br>　　（5）体内实验：在人源NCI-H526、ES-2、MDA-MB231的BALB/c裸鼠移植瘤模型中，评估化合物NHWD-930的体内抗肿瘤活性。为了评估化合物NHWD-930的代谢稳定性，我们使用三种不同动物物种（人、大鼠和小鼠）的肝微粒体来确定它们的降解程度。并采用平衡透析实验法对化合物在血浆中的稳定性及蛋白结合能力进行检测。<br>　　结果：<br>　　根据计算机模拟结果，我们合成了7个化合物，结构经MS、1H-NMR鉴定并与文献比对确证。通过与靶点蛋白的结合实验，我们发现化合物NHWD-930是待测化合物中活性最好的，并且对BET家族蛋白具有广泛的抑制作用。在体外抗肿瘤活性研究中，化合物NHWD-930表现出了明显的细胞增殖抑制作用，并且比其结构原型BMS-986158和经典药物JQ1的抑制活性更强。相应的机制研究结果也表明，化合物NHWD-930能够显著抑制肿瘤细胞当中的BRD4蛋白激活和原癌基因c-MYC的表达。关于化合物NHWD-930的体内研究结果表明，化合物NHWD-930与BMS-986158相比，对小鼠模型的体重影响显著降低，并且对血浆、肺部和小细胞肺癌肿瘤均具有良好的透过性，血浆蛋白结合能力与临床使用的抗凝血药华法林相当，在动物和人体内的代谢稳定性良好。<br>　　结论：<br>　　实验结果表明，化合物NHWD-930对BET家族蛋白具有良好的抑制活性，能够有效地抑制细胞增殖进程，甚至较其他临床阶段药物更为有效。此外，化合物NHWD-930的毒性显著降低、安全性提高，也表现出良好的代谢稳定性和血浆蛋白结合能力，并在血浆、肺部和肿瘤中表现出良好的吸收特性。综上所述，与其他临床阶段药物比较，化合物NHWD-930是一种抑制作用强、毒性低、安全性高的候选药物。