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摘要目的：基于网络药理学和分子对接的方法阐明AhR、Nrf2信号通路是否可以被苣荬菜（Sonchus arvensis，SA）有效成分和苯并芘（Benzo(a)pyrene,BaP）影响，液-质联用（LC-MS）技术分析鉴定苣荬菜醇提物的主要成分中含有芹菜素（Apigenin，Api）和槲皮素（Quercetin，Que），进一步通过体外实验探讨苣荬菜有效成分拮抗BaP对AhR、Nrf2信号通路作用的影响。<br>　　方法：（1）文献检索苣荬菜有效成分筛选（OB≥30%，DL≥0.18，Caco-2＞0及较长HL）并预测靶点，并构建“化合物-靶点”网络拓扑图，CTD数据库预测BaP作用靶点并与苣荬菜靶点取交集，对靶点进行PPI、生物功能富集分析（PValue＜0.01，FDR＜0.01），分子对接分析对接位点。（2）采用液-质联用（LC-MS）技术分析鉴定苣荬菜醇提物的主要成分中含有芹菜素和槲皮素。（3）采用MTT法确定BaP、芹菜素、槲皮素作用于HepG2细胞的最佳药物浓度范围。（4）采用试剂盒检测不同浓度芹菜素、槲皮素拮抗BaP对BaP代谢物BPDE导致的DNA损伤及氧化加合物8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2-deoxyguanosine，8-OHdG）的影响，并通过高内涵细胞成像系统（Molecular Devices）检测活性氧（Reactive oxygen species，ROS）荧光强度，明确芹菜素、槲皮素是否可以对BaP导致的细胞毒性起到一定的保护作用。（5）采用qPCR、Western Blot方法检测BaP（0.1、1、10和100μmol·L-1）对AhR、Nrf2及下游基因和蛋白的表达，以明确BaP对AhR和Nrf2信号通路的作用。（6）采用qPCR和Western Blot方法检测不同浓度芹菜素（25、50、100、150和200μmol·L-1）、芹菜素（25、50、100μmol·L-1）+BaP（1μmol·L-1）对AhR、Nrf2及下游基因和蛋白表达的影响，免疫荧光法检测芹菜素+BaP处理HepG2细胞后的CYP1A1、HO-1蛋白荧光强度，以明确芹菜素是否可以拮抗BaP对AhR、Nrf2及下游基因和蛋白作用的影响。（7）采用qPCR和Western Blot方法检测不同浓度槲皮素（25、50、100、150和200μmol·L-1）、槲皮素（25、50和100μmol·L-1）+BaP（1μmol·L-1）对AhR、Nrf2及下游基因mRNA和蛋白表达的影响；免疫荧光法检测槲皮素+BaP处理HepG2细胞后的CYP1A1、HO-1蛋白荧光强度，以明确槲皮素是否可以拮抗BaP对AhR、Nrf2及下游基因和蛋白作用的影响。（8）AhR激动剂（CAY10465）、BaP、BaP+AhR抑制剂（CH-223191）和BaP+ROS抑制剂（NAC）处理HepG2细胞，采用qPCR法和Western blot法检测BaP激活AhR后对Nrf2的影响；Nrf2激动剂（tBHQ）、BaP和BaP+Nrf2抑制剂（ML-385）处理HepG2细胞，qPCR法和Western blot法检测BaP激活Nrf2后对AhR的影响；最后采用免疫共沉淀明确AhR与Nrf2是否存在相互作用。<br>　　结果：（1）从苣荬菜中共筛选得到10个有效成分，336个靶点，度值较高的化合物有槲皮素（307）、芹菜素（158）；通过生物功能富集分析，苣荬菜有效成分及BaP通过影响DNA转录、RNA酶转录调控、细胞增殖、凋亡和对信号通路的调控等发挥生物学效应；由分子对接结果可知，有效成分、BaP通过与AhR、Keap1蛋白形成氢键、芳环堆积力、范德华力、σ键、硫键、疏水作用力等，从而保证蛋白和配体结合的稳定性。（2）苣荬菜醇提物的主要成分中包含芹菜素和槲皮素。（3）根据MTT结果选定BaP作用浓度为0.1、1、10和100μmol·L-1，芹菜素和槲皮素作用浓度为25、50、100、150和200μmol·L-1进行后续实验。（4）BaP使BPDE-DNA加合物和8-OHdG含量升高（P＜0.05），芹菜素、槲皮素可以抑制BaP导致的BPDE-DNA加合物和8-OHdG的产生（P＜0.05），且具有浓度依赖性。BaP可以增强HepG2细胞ROS荧光强度（P＜0.05），中、高浓度芹菜素、槲皮素拮抗BaP使ROS荧光降低（P＜0.05）。（5）不同浓度BaP可以激活AhR信号通路（具有浓度依赖性）代谢BaP，在代谢过程中产生ROS导致细胞激活抗氧化Nrf2信号通路保护细胞由BaP带来的氧化损伤。（6）芹菜素是AhR的部分激动剂，并且芹菜素通过激活CYP1A1、1A2和1B1代谢BaP。随着芹菜素浓度升高，促进Nrf2核转录，而且不同浓度的芹菜素可以激活Nrf2信号通路基因和蛋白表达（P＜0.05）；中、高浓度芹菜素可以拮抗BaP，从而抑制Nrf2信号通路基因和蛋白表达（P＜0.05）。免疫荧光法检测不同浓度芹菜素拮抗BaP对CYP1A1、HO-1蛋白表达的作用，蛋白的荧光强度与基因、蛋白表达结果一致。（7）槲皮素属于AhR低亲和力配体，槲皮素通过调节CYP1A家族消除BaP导致的细胞毒性。中、高浓度槲皮素可以拮抗BaP，从而抑制抗氧化通路基因和蛋白表达（P＜0.05）。免疫荧光法检测不同浓度槲皮素拮抗BaP对CYP1A1、HO-1蛋白表达的影响，蛋白的荧光强度与基因、蛋白表达结果一致。（8）AhR和BaP代谢过程中产生的ROS共同调控Nrf2蛋白表达，同时Nrf2可以影响AhR蛋白表达；通过免疫共沉淀表明AhR与Nrf2存在相互作用。<br>　　结论：网络药理学研究表明苣荬菜、BaP与AhR、Nrf2信号通路关系密切，同时苣荬菜、BaP通过各种作用力与AhR、Nrf2蛋白结合；体外实验表明苣荬菜有效成分芹菜素和槲皮素分别通过CYP1A家族、CYP1B1和CYP1A家族代谢BaP，增强机体抗遗传毒性以发挥解毒抗氧化功效，从而部分消除BaP带来的细胞毒性作用，使BPDE-DNA加合物和8-OHdG含量降低；此外发现AhR与Nrf2存在相互作用。