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控释VEGF对股骨头BMECs成血管分化及miR-222表达的影响

摘要目的:探讨仿生控释VEGF的PELA微囊支架作用于股骨头骨微血管内皮细胞对miR-222表达的影响和其对骨微血管内皮细胞成血管分化的影响,旨在为股骨头坏死的治疗提供一种新治疗方向。<br>  方法:首先取纳入标准的股骨头坏死患者股骨头,获取松质骨,区代离心法分离,纯化后培养骨微血管内皮细胞,使用2-5代BMECs用于相关细胞实验。后采用复乳溶剂挥发法及二氯甲烷熏蒸法制备包封VEGF的PELA微囊支架和PELA支架,通过ELSIA试剂盒检测10mgVEGF的PELA微囊支架置于1ml PBS中1,2,4,8,12,16,22,26天上清液中VEGF的浓度;CCK-8法检测在3,7,14天微囊支架对BMECs的毒性作用;实验分为空白组、PELA组、PELA/VEGF组,按分组加入微囊支架20mg与第三代骨微血管内皮细胞共培养,在3,7,14天Western blot检测各组骨微血管内皮细胞VEGFR,TGF-β和bFGF的表达,实时定量PCR检测各组骨微血管内皮细胞miR-222的表达。每组设3个重复,plt;0.05具有统计学意义。<br>  结果:①释放检测结果:包封VEGF的PELA微囊支架在1,2,4,8,10,14,18,22,26d VEGF浓度逐渐增加,早期释放较快,第2天之后便能够以平稳的曲线稳定微量释放,在第22天的时候累计释放已超过一半;②毒性检测结果:PELA/VEGF组,空白对照和PELA组在3,7,14天细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),即PELA微囊支架短期内对骨微血管内皮细胞活性无影响;③蛋白检测结果:在控释VEGF的PELA微囊支架作用下3,7,14天VEGFR(F=1714.75,P<0.01)、TGF-β(F=5235.571,P<0.01)、bFGF(F=1027,P<0.01)表达量逐渐增加,其中PELA/VEGF组在3,7,14天VEGFR的表达量均高于对照组及PELA组,PELA/VEGF组高于对照组及PELA组在第7天与第3天、第14天与第3天、第14天与第7天TGF-β表达量,且PELA/VEGF组第7,14天TGF-β的表达量高于对照组及PELA组,而PELA/VEGF组第3天bFGF的表达量低于对照组,第7天则显著高于对照组,且对照组bFGF表达量第3天与第7天差异无统计学意义;④基因检测结果:PELA/VEGF组在第14天miR-222的表达量显著低于第3和7天,第7天的表达量显著低于第3天。而对照组和PELA组的表达逐渐降低,第14天miR-222的表达量显著低于第3和7天,第7天的表达量与第3天无差异。在第14天,PELA/VEGF组miR-222的表达量最低。<br>  结论:①控释VEGF的PELA球囊支架能够模拟新血管形成过程中VEGF稳定、持续释放的特点;②控释VEGF的PELA球囊支架能够促进BMECs成血管相关蛋白VEGFR,TGF-β和bFGF的表达,有利于新血管形成,是治疗股骨头坏死的有效切入点;③控释VEGF的PELA球囊支架能够抑制BMECs的miR-222的表达。

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导师 任前贵
学位信息:
内蒙古医科大学 临床医学 外科学(硕士) 2022年
分类号 R318.08
发布时间 2022-11-18
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