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摘要目的：POF（premature ovarian failure,卵巢早衰）指年龄小于40岁的女性，伴有4～6个月的停经，检测FSH（follicle stimulating hormone,卵泡刺激素）＞40IU/L连续两次且间隔大于4周的卵巢功能衰竭的生殖系统疾病。卵巢早衰的病因复杂，包括遗传学因素，自身免疫性因素，代谢或感染因素，医源性因素等。然而，在大约90％的病例中病因仍未明确。在过去的几十年中，基因组的非编码部分已被认为对人体的生理发育和疾病发生至关重要。微小核糖核苷酸（microRNA,miRNA）是一类长度大约为19～25个核苷酸组成的单链非编码蛋白核苷酸分子，可通过与mRNA的3''非翻译区（UTR）配对并触发RNA降解或翻译抑制来调节转录后水平的靶基因表达。据统计，miRNA可调节60％以上的蛋白质编码基因的翻译，并参与增殖，分化，凋亡和肿瘤发生等调控。已有研究表明miRNAs在卵巢的调控中有重要的作用，但在POF的报道却很少。本研究重点关注与POF相关的miRNAs，初步了解miRNAs的表达及功能，这将有助于特发性POF的病因学研究，为卵巢功能减退导致不孕的患者诊治提供新的思路。<br>　　方法：1.本研究以小鼠为研究对象，腹腔注射顺铂来构建POF小鼠模型，通过连续监测小鼠阴道脱落细胞来判断小鼠动情周期紊乱情况；HE染色观察卵巢组织形态学改变情况；以及Elasa法测定AMH（anti-mullerian hormone,抗缪勒管激素）水平、体重和精神状态等情况来确定小鼠POF模型是否构建成功。<br>　　2.运用实时荧光PCR（qPCR）技术检测正常组和模型组（POF组）小鼠卵巢组织miR-199a、miR-183、miR-181a、miR-92a、miR-21的差异性表达。<br>　　3.运用miRNA靶基因预测数据库来预测miR-199a、miR-183、miR-181a、miR-92a、miR-21调控的靶基因。以及GO富集分析预测靶基因的生物学性能；DO富集分析预测靶基因与疾病的关系；KEGG富集分析预测靶基因与信号通路的调控的关系。<br>　　4.RT-PCR检测预测出的靶基因SMAD7、FOXO1、SIRT1mRNA表达水平。<br>　　结果：1.小鼠POF模型构建成功。其特点为：小鼠动情周期紊乱；抗缪勒管激素（AMH）水平降低；体重下降；精神状态不佳；以及卵巢组织学形态改变。<br>　　2.检测两组miRNAs的相对表达量，qPCR结果显示：与正常组小鼠卵巢组织相比，发现模型组小鼠卵巢组织中miR-199a、miR-183、miR-92a、miR-21的表达量降低，而miR-181a的表达量升高（p＜0.05），此差异有统计学意义。<br>　　3.经生物信息学分析和查阅相关文献得出miR-199a的靶基因为SIRT1；miR-183的靶基因为FOXO1；miR-181a的靶基因为SIRT1、SMAD7；miR-92a的靶基因为SMAD7；miR-21的靶基因为SMAD7。GO富集分析显示，这5个miRNAs的预测靶基因大都在生殖结构发育、细胞迁移正向调节、凋亡信号通路调节等生物学过程富集；DO富集分析显示，有关女性生殖疾病和卵巢相关疾病排名比较靠前，表明这5个miRNAs的预测靶基因可能在卵巢相关疾病中有调控作用；KEGG富集分析显示，排名靠前的信号通路大多数都参与调控卵泡发育、闭锁和颗粒细胞凋亡等，并且这5个miRNAs的预测靶基因可能参与调控。<br>　　4.模型组和对照组卵巢组织中SMAD7、FOXO1、SIRT1mRNA相对表达量比较，结果显示:与对照组相比，SIRT1mRNA在模型组表达降低；SMAD7和FOXO1mRNA在模型组表达均升高，两组比较差异均有统计学意义（p＜0.05）。<br>　　结论：1.POF小鼠模型构建成功。<br>　　2.与正常小鼠的卵巢组织相比，POF组小鼠卵巢组织中miR-199a、miR-183、miR-92a、miR-21的表达量降低，而miR-181a的表达量升高（p＜0.05），初步推测miR-181a可作为POF诊断标志物，但仍需进一步深入研究。<br>　　3.初步预测miR-199a的表达可能通过靶向SIRT1、miR-183的表达可能通过靶向FOXO1、miR-181a的表达可能通过靶向SMAD7和SIRT1、miR-92a的表达可能通过靶向SMAD7、miR-21的表达可能通过靶向SMAD7参与卵巢早衰的发生发展过程。初步探索SIRT1、FOXO1和SMAD7在卵巢早衰小鼠卵巢组织mRNA水平表达可能对探索卵巢早衰病因及临床诊治提供一个新思路。