摘要目的:<br> 探讨实体瘤微环境中是否存在抑制CD8+T细胞增殖和功能的TDSFs;筛选并验证肿瘤微环境中的关键TDSFs;分析CST2在肿瘤患者预后中的作用<br> 方法:<br> (1)通过EasySepMousePan-NaiveTCellIsolationKit磁珠分选获取小鼠脾脏中的Na?veT细胞,以及CD3/28体外刺激NaiveT细胞的增殖与活化。<br> (2)通过流式细胞术和CFSE活细胞荧光标记,对比在完全培养基(completemedium,CM)和多个癌种肿瘤条件培养基(tumorconditionedmedium,TCM)培养下,CD8+T细胞的增殖(标记荧光的稀释信号)以及功能分子(GranzymeB和IFN-γ)的差异。<br> (3)研究基于生物信息学分析大数据,TCGA数据库提取乳腺癌,结肠癌和皮肤癌原始mRNA的表达处理数据,下载分泌蛋白数据集,差异分析获取肿瘤中高表达的分泌蛋白基因。<br> (4)通过q-PCR验证差异基因在乳腺癌,结肠癌和黑色素瘤细胞水平的表达。<br> (5)通过K-M生存分析和Western-Blot在肿瘤患者中探讨能做为预后标记物的关键基因。<br> 结果:<br> (1)与CM培养组相比,TCM培养组的CD8+T细胞未观察到明显的CFSE荧光稀释信号,且MFI显著升高(p<0.05),提示肿瘤细胞培养上清中存在明显抑制T细胞增殖的分泌因子<br> (2)与CM培养组相比,TCM培养组CD8+T的GranzymeB和IFN-γ表达量显著降低(p<0.05),表明肿瘤细胞培养上清中存在显著抑制CD8+T细胞功能的分泌因子。<br> (3)通过差异分析,在乳腺癌,结肠癌和皮肤癌中筛选获得13个显著高表达的分泌蛋白基因,分别是SPP1、ESM1、LRP8、NXPH1、MMP10、MMP1、ADAMTS20、CCL25、GDF15、CST2、BPIFB1、R3HDML、MMP11。<br> (4)通过q-PCR与正常乳腺上皮细胞相比,在MDA231,MCF-7,ZR7530,T47D,BT549乳腺癌细胞系中,上述基因均显著高表达。<br> (5)通过K-M生存分析和Western-Blot,CST2能做为预测肿瘤患者预后生存的生物标记物。<br> 结论:<br> 实体瘤中存在显著抑制CD8+T细胞增殖和功能的TDSFs,在TME中肿瘤细胞能通过产生TDSFs抑制CD8+T细胞的增殖和活化。通过生信挖掘和q-PCR验证,在癌症患者中中,存在SPP1、ESM1、LRP8、NXPH1、MMP10、MMP1、ADAMTS20、CCL25、GDF15、CST2、BPIFB1、R3HDML、MMP11等13个显著高表达的分泌蛋白基因。CST2能做为预测肿瘤患者预后生存的生物标记物。
更多相关知识
- 浏览9
- 被引1
- 下载4
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文