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摘要尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1（UGT1A1）是许多外源性药物及机体内源性胆红素的重要代谢酶，UGT1A1的表达或者功能异常会导致机体葡萄糖醛酸反应减弱或者终止，胆红素无法转化为水溶性大、极性高的可排泄代谢物进而蓄积在体内引发高胆红素血症。齐墩果酸（Oleanolic Acid,OA）目前已广泛应用于临床急性黄疸型肝炎和病毒性肝炎等疾病的治疗，具有保肝、抗炎等作用。<br>　　课题组前期研究已证实齐墩果酸可通过激活PXR从而诱导HepG2细胞中UGT1A1的表达。蛋白激酶C（Protein Kinase C,PKC）是机体内重要的信号分子，活化的PKC可通过抑制核受体PXR（Pregnane X Receptor,PXR）的活性进而抑制其下游靶基因的表达。齐墩果酸如何通过PKC/PXR信号通路进而调控UGT1A1靶基因的表达尚不清楚，值得深入探索。<br>　　目的：<br>　　通过正常或过表达hPKCα及萘异硫氰酸酯（ANIT）致损伤的HepG2细胞模型，研究齐墩果酸干预后PKCα、PXR与热休克蛋白（HSP90α）、类固醇受体激活蛋白1（SRC1）的结合影响及靶基因UGT1A1表达变化，探索齐墩果酸基于PKC/PXR信号通路对靶基因UGT1A1的分子调控机制，为胆红素代谢障碍性疾病的治疗提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　1、在正常HepG2细胞中，采用RT-qPCR、蛋白质免疫共沉淀、免疫荧光、Western-blot等技术，探讨齐墩果酸对PXR、SRC1、HSP90α及靶基因UGT1A1表达的影响，以及PKCα、PXR与HSP90α、SRC1结合的影响。<br>　　2、在过表达hPKCα的HepG2细胞中，通过RT-qPCR、Western-blot、质粒构建、瞬时共转染、蛋白质免疫共沉淀等技术，研究齐墩果酸对PKCα、PXR及靶基因UGT1A1表达的影响，以及PKCα、PXR与HSP90α、SRC1结合的影响。<br>　　3、在ANIT致损伤HepG2细胞模型中，采用ELISA、Western-blot等研究技术考察齐墩果酸对PKCα、PXR及靶基因UGT1A1表达的影响。<br>　　结果：<br>　　1、齐墩果酸对正常HepG2细胞中PXR、SRC1、HSP90α及靶基因UGT1A1表达的影响，以及对PKCα、PXR与HSP90α、SRC1相互结合的影响。<br>　　（1）在正常HepG2细胞中，齐墩果酸明显上调了靶基因UGT1A1mRNA和蛋白的表达，mRNA增加了76.40%、蛋白增加了47.90%，对PXR总蛋白及核蛋白的表达也有上调作用，而对SRC1、HSP90α的表达无明显改变。<br>　　（2）在正常HepG2细胞中，齐墩果酸干预后PXR在胞浆中与HSP90α结合减少了42.87%，PXR与SRC1结合增加了43.84%，PMA干预后PKCα与HSP90α结合减少，齐墩果酸可以拮抗PMA的这种作用进而促进PKCα与HSP90α的结合。<br>　　2、齐墩果酸对过表达hPKCα的HepG2细胞中PKCα、PXR及靶基因UGT1A1表达的影响，以及对PKCα、PXR与HSP90α、SRC1结合的影响。<br>　　（1）在过表达hPKCα的HepG2细胞中，细胞质中PKCα的表达量升高，细胞膜上PKCα的表达无明显影响，提示过表达hPKCα并不会引起PKCα活化状态的改变。<br>　　（2）在过表达hPKCα的HepG2细胞中，PMA干预后HSP90α与PKCα结合减少42.00%，HSP90α与PXR结合增多了137.98%，PXR与SRC1结合减少了41.50%，UGT1A1表达下调，当与齐墩果酸共同干预时，上述作用均被拮抗甚至逆转。<br>　　3、齐墩果酸对ANIT致损伤HepG2细胞中PKCα、PXR及靶基因UGT1A1表达的影响。<br>　　（1）与正常HepG2细胞相比，ANIT致损伤HepG2细胞中，IL-6、TNF-α等炎症因子明显升高，PKCα的膜蛋白表达明显上升，PXR的核蛋白表达明显下降，靶基因UGT1A1表达减少了41.25%。<br>　　（2）ANIT致损伤HepG2细胞中，齐墩果酸干预后，IL-6、TNF-α等炎症因子明显降低，PKCα膜蛋白表达显著下调，PXR核蛋白表达显著上调，同时靶基因UGT1A1表达增加了64.60%。<br>　　结论：<br>　　1、在正常及过表达hPKCα的HepG2细胞中，PXR与PKCα可以竞争结合细胞质中的辅助抑制因子HSP90α，齐墩果酸可通过拮抗PMA诱导的PKCα活化作用，抑制PKCα向细胞膜转移，促进细胞质中PKCα与HSP90α的结合进而减少PXR与HSP90α的结合，有利于PXR活化入核增加，进而与SRC1结合增加，最终上调下游靶基因UGT1A1的表达。<br>　　2、ANIT致损伤HepG2细胞中，炎症状态下PKCα活化并向细胞膜转移，细胞质中PKCα减少，PXR核蛋白也相应减少。齐墩果酸可通过抑制PKCα活化、促进PXR入核进而上调靶基因UGT1A1蛋白表达而发挥抗炎症损伤作用。