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FYN的泛癌分析与FYN低表达通过Akt/mTOR抑制Daudi细胞的增殖

摘要[目的]1.通过泛癌分析揭示FYN作为肿瘤重要免疫调节因子的地位,为肿瘤的预后预测和免疫治疗提供新的靶点。2.构建稳定低表达FYN基因的Daudi细胞系,观察干扰FYN基因表达后对Daudi细胞的增殖的影响,并初步探究FYN与Akt/mTOR网络调节之间的调控关系,为Epstein-Barr病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)相关肿瘤的分子机制研究提供实验依据。<br>  [方法]:1.从GEO数据库中获取33种常见肿瘤的相关信息,采用Sangerbox在线分析工具进行FYN的表达与肿瘤预后及肿瘤免疫的泛癌分析。2.利用生物信息学方法对FYN与GSE31312数据集弥漫大B淋巴瘤患者临床病理资料的关系分析及预后相关性进行分析研究。3.采用RT-qPCR和Westernblot方法检测伯基特淋巴瘤Raji细胞、Daudi细胞和Ramos细胞中FYN基因的表达情况。4.将Tet-pLKO-puro载体及FYNshRNA干扰序列,经“酶切—连接—转化—阳性克隆的筛选”步骤获得干扰载体pLKO-FYN-shRNA;将构建成功的pLKO-FYN-shRNA载体包装转入293T细胞中获取病毒上清液,再转染Daudi细胞,建立FYN稳定低表达的Daudi细胞系。5.采用RT-qPCR和WesternBlot验证FYN基因的干扰效果。6.通过CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验观察干扰FYN基因表达对EBV阳性淋巴瘤Daudi细胞系增殖的影响。7.采用WesternBlot检测细胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen,PCNA)的表达及增殖免疫相关通路Akt/mTOR网络调节的表达。<br>  [结果]:1.FYN在多种肿瘤中显示低表达。FYN仅与少数肿瘤类型患者的生存期相关。FYN在多种肿瘤中与肿瘤突变负荷和微卫星不稳定性相关。FYN在多种肿瘤中与多种免疫调节因子明显相关。<br>  2.GEO数据分析在弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)患者中(数据集号:GSE31312),FYN高表达患者的总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)较长。且FYN表达与患者年龄、IPI评分及有无结外侵犯有关(分别为P=0.0096,P=0.0129,P=0.0115),而与患者性别、AnnArbor分期、乳酸脱氢酶(LDH)和患者基因表达谱分型无关(分别为P=0.9696,P=0.5814,P=0.1100,P=0.1974)。<br>  3.EBV阳性淋巴瘤Raji和Daudi细胞中FYN的表达水平低于EBV阴性淋巴瘤Ramos细胞。<br>  4.干扰FYN基因的表达可抑制EBV阳性淋巴瘤Daudi细胞的增殖。<br>  5.FYN低表达后PCNA下调。<br>  6.FYN低表达后抑制了Akt/mTOR网络调节。<br>  [结论]:<br>  1.干扰FYN基因表达可抑制EBV阳性淋巴瘤Daudi细胞的增殖能力。<br>  2.FYN低表达可能通过抑制Akt/mTOR网络调节抑制Daudi细胞的增殖。

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