摘要目的:<br> 分析MiR-20b-5p和AEN(apoptosis enhancing nuclease)表达改变对鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞放疗敏感性的影响,并探讨 MiR-20b-5p通过靶向下调 AEN表达增强鼻咽癌细胞放疗抵抗的分子机制,为鼻咽癌的诊断及治疗提供分子靶标。<br> 方法:<br> 采用不同电离辐射(IR)剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)照射,通过 CCK-8细胞增殖实验、划痕愈合实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移与侵袭实验等方法从不同层面分析MiR-20b-5p和AEN表达改变对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响;采用quantitative real time-PCR(qRT-PCR)、Western Blot等实验探讨 MiR-20b-5p通过靶向下调AEN表达增强鼻咽癌细胞放疗抵抗的分子机制。<br> 结果:<br> 1、MiR-20b-5p表达水平随着放疗剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)的增加而升高,在10Gy时达到最高水平,提示放疗可以诱导MiR-20b-5p的表达。<br> 2、相较放射处理前,X线可呈剂量依赖性抑制鼻咽癌细胞的存活;在相同放疗剂量下,上调 MiR-20b-5p可明显促进鼻咽癌细胞(CNE1、HNE1细胞)的增殖,而下调MiR-20b-5p表达显著抑制鼻咽癌细胞的增殖。经IR照射后,鼻咽癌细胞的克隆形成能力显著降低,且随着IR照射剂量的增加,鼻咽癌细胞克隆形成能力降低的更为明显;但在相同电离辐射剂量下,上调MiR-20b-5p后鼻咽癌细胞的克隆形成数目显著增加,而下调MiR-20b-5p的表达后鼻咽癌细胞的克隆形成数目明显减少。进一步研究发现,尽管MiR-20b-5p表达改变,鼻咽癌细胞经电离辐射(IR)照射以后,MiR-20b-5p的表达均有增加,但上调MiR-20b-5p可明显削弱放射线对鼻咽癌细胞的杀伤作用,而下调MiR-20b-5p可显著增强放射线对鼻咽癌细胞的杀伤作用。<br> 3、在6Gy的 IR照射下,上调MiR-20b-5p表达后可显著促进细胞的侵袭、迁移,而下调 MiR-20b-5p后明显抑制细胞的侵袭、迁移。结果说明,MiR-20b-5p参与了鼻咽癌细胞放疗抵抗的调控。<br> 4、上调MiR-20b-5p可显著降低AEN的表达,而下调MiR-20b-5p可以明显增加AEN的表达;同时还发现,AEN的表达随着放疗剂量的增加逐渐上调(P<0.05),提示 MiR-20b-5p可能通过靶向抑制AEN的表达来增强鼻咽癌细胞的放疗抵抗。<br> 5、过表达AEN可以明显削弱MiR-20b-5p对鼻咽癌细胞增殖的促进作用,敲低AEN则明显逆转下调MiR-20b-5p引起的鼻咽癌细胞增殖抑制作用;与相应对照组相比,无论照射与否,上调MiR-20b-5p表达后,其细胞内AEN及促凋亡蛋白(RARP、caspase-3、Bax)的表达明显减少,而抗凋亡蛋白(Bcl-xl)表达显著增加;而下调MiR-20b-5p表达后,其细胞内 AEN及促凋亡蛋白(RARP、caspase-3、Bax)的表达明显增加,抗凋亡蛋白(Bcl-xl)则表达显著减少。<br> 结论:<br> 1、MiR-20b-5p与鼻咽癌细胞放疗抵抗密切相关,MiR-20b-5p表达上调可增强鼻咽癌细胞的放疗抵抗,其机制与 MiR-20b-5p靶向下调AEN的表达有关。<br> 2、MiR-20b-5p可能是克服鼻咽癌细胞放疗抵抗的潜在分子靶点。
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