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肝细胞癌患者补体C1s表达变化及临床意义

摘要目的探讨补体C1s在肝细胞癌患者(HCC)mRNA水平和蛋白水平的表达变化及临床意义,以及是否可以应用于HCC的临床辅助诊断。方法选择2020年6月至2021年9月在泰州市人民医院病理诊断为HCC并且入院后未经放化疗的患者30例作为HCC组,选择HCC组患者肝部分切除术后的HCC组织、癌周围组织,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)来进行观察、测试及记录HCC组织及癌组织的周围组织的补体C1s的mRNA表达情况的高低;使用免疫组化法进行检查和测试HCC组织及癌周围组织中C1s蛋白表达的具体高低情况。根据以上实验结果,分析HCC患者补体C1s表达情况及其病理特点在临床上可能存在的关系。选取同医院2020年9月至11月健康体检人群30例作为对照组,采集HCC组患者手术前的血清、手术两周后的血清及对照组血清样本,进而使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测三组血清C1s含量。正常人肝组织细胞株(QSG-7701)由实验组成员采购于中科院上海细胞研究所,肝癌细胞株(Huh-7)、(Hepg-2)来自于xx医院中心试验室。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测补体C1s在人肝细胞(QSG-7701)、肝癌细胞(Huh-7)、(Hepg-2)的表达水平,并将肝癌细胞(Huh-7)、(Hepg-2)的C1s基因敲除,比较敲除前后补体C1s在其mRNA水平上的表达变化。结果HCC组织中补体C1s的mRNA的表达情况显著高于癌周围组织,而且二者之间的差异性在统计学水平具有显著意义(P<0.05);MTS法分别测定肝癌细胞(Huh-7)、(Hepg-2)和敲除C1s基因后的肝癌细胞(Huh-7)、(Hepg-2)的细胞增殖程度,结果显示敲除C1s基因后的肝癌细胞(Huh-7)、(Hepg-2)的细胞增值明显受到抑制。免疫组化检测补体C1s在HCC组织和癌旁组织的蛋白水平表达的实验结果表明,就补体C1S蛋白的阳性率及强阳性率结果而言,HCC组织皆显著高于癌症周围组织而且二者之间的高低差异性经统计学证实具有意义(P<0.05);同时对HCC患者补体C1s的表达高低情况与临床病理特点之间可能存在的关系进行分析,结果表明补体C1s蛋白表达水平与各指标均无显著相关性;ELisa法检测HCC组术前、术后2周及对照组血清C1s含量,结果表明三组血清中C1s含量无明显差异。采用RT-PCR检测补体C1s在人肝细胞(QSG-7701)、肝癌细胞(Huh-7、Hepg-2)的表达水平,并敲除基因后比较补体C1s在其mRNA水平上的表达变化。结果表明人肝细胞(QSG-7701)组与肝癌细胞(Huh-7、Hepg-2)组相比C1SmRNA明显低表达,敲除基因后C1smRNA表达下调明显。结论HCC组织和癌旁组织中补体C1s在mRNA和蛋白水平的表达存在显著差异,可能与肝癌的发生发展中密切相关,但目前外周血清中补体C1s的检测还无法用于HCC的辅助诊断,补体C1s在HCC患者中的临床应用还有待进一步研究。

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导师 张长和
发布时间 2022-12-13(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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