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摘要目的：耳听力损失是人类最常见的感觉障碍之一，也是全球关注的严重问题。耳毒性药物会诱导毛细胞(HC)损伤，这是感音神经性听力损失的主要原因之一。化疗药物（如顺铂）、氨基糖苷类药物（如新霉素）和袢利尿剂（如呋塞米）是耳毒性药物的主要类别，其中氨基糖苷类抗生素（aminoglycosideantibiotic，AmAn）的耳毒性相对而言最为严重，甚至对于某些遗传上具有易感性的患者来说，可能导致永久听力丧失。目前主要的防护策略是减少毛细胞对于AmAn的摄入，通过抗氧化剂保护，然而开发新药以及激活热休克蛋白等手段尚不成熟。基因治疗是在基因水平上进行DNA重组和基因导入技术来治疗疾病的方法。本课题研究内容为通过AAV-Anc80系统包被病毒以敲低小鼠耳蜗毛细胞中Gm2694基因的表达，然后通过新霉素建造药物性耳聋的模型，研究Gm2694基因在其中发挥的作用。<br>　　方法：在HEI-OC-1细胞系以及野生型小鼠耳蜗基底膜通过RT-QPCR检测Gm2694的表达情况；构建含Gm2694-Sh目的片段的重组质粒转染HEI-OC1细胞,构建内耳重组腺病毒相关病毒感染离体的小鼠耳蜗基底膜以敲低Gm2694在HEI-OC-1细胞和小鼠耳蜗基底膜毛细胞中的表达；通过流式细胞分析、对HEI-OC-1细胞免疫荧光染色、对基底膜铺片对毛细胞免疫荧光染色，观察新生小鼠耳蜗基底膜毛细胞以及HEI-OC-1细胞的凋亡情况；使用新霉素建造药物性耳聋模型，观察Gm2694基因敲除后新霉素对小鼠耳蜗毛细胞损伤作用的变化。<br>　　结果：1、Gm2694在HEI-OC-1细胞和野生型小鼠耳蜗基底膜中均有表达，野生型小鼠耳蜗基底膜中的表达量较HEI-OC-1细胞高；2、构建含Gm2694-Sh目的片段的重组质粒通过Lipofectamine2000转染至HEI-OC1细胞，经RT-QPCR检测后发现Gm2694表达量降低，证明Gm2694-Sh质粒可以敲低Gm2694基因的表达。根据RT-QPCR结果选择敲低效率最高的Gm2694-Sh4质粒，利用以构建好的Gm2694-Sh4质粒通过293T细胞制备AAV-Anc80病毒，作用于野生型小鼠耳蜗基底膜，以敲低Gm2694基因的表达；3、使用Lipofectamine2000将Gm2694-Sh4质粒转染至HEI-OC1细胞，新霉素损伤HEI-OC1细胞后行AnnexinV和PI染色，再通过流式细胞仪上机分析检测细胞中的凋亡情况，发现敲低Gm2694后，在新霉素损伤HEI-OC1细胞时，凋亡细胞增多。同时对HEI-OC1细胞行免疫荧光染色，得到了相同的结果，即敲低Gm2694后，在新霉素损伤HEI-OC1细胞时，凋亡细胞增多。解剖新生小鼠耳蜗基底膜铺片行体外组织培养，利用包被好的Gm2694-Sh4-AAV-Anc80病毒敲低其基因的表达，经过新霉素损伤后对基底膜行免疫荧光染色，发现实验组较对照组毛细胞缺失更严重。<br>　　结论：1、Gm2694基因在HEI-OC1细胞以及小鼠耳蜗基底膜中均有表达，以lncRNA的形式存在，并在细胞中发挥作用。<br>　　2、本课题基本明确了在HEI-OC1细胞以及小鼠耳蜗基底膜中敲低Gm2694基因后会增加新霉素对耳蜗毛细胞的损伤，导致毛细胞凋亡增多。<br>　　3、本课题初步确定了Gm2694在小鼠耳蜗毛细胞中发挥的作用，根据现有实验结果提示该基因对小鼠耳蜗毛细胞具有保护作用，具体的作用机制还有待进一步验证。