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摘要CD8+T细胞在机体的抗肿瘤免疫应答中扮演了关键的角色，是执行免疫监视功能的主要效应细胞。然而在抑制性的肿瘤免疫微环境(tumormicroenvironment，TME）中，持续的抗原刺激和增强表达的共抑制信号诱导浸润在肿瘤中的抗原特异性CD8+T细胞发生功能耗竭，表现为持续上调表达包括PD-1在内的一系列免疫抑制性分子、渐进性丧失效应功能、增殖潜力下降、容易凋亡，不能有效控制肿瘤进展。近年来，阻断PD-1与PD-L1相互作用的单抗药物在许多类型癌症患者中表现出了良好的治疗效果，但响应PD-1/PD-L1免疫检查点阻断治疗（immunecheckpointblockade，ICB）的具体细胞亚群和分子机制仍未被阐明。最近研究表明，ICB很难改变TME中的耗竭CD8+T细胞已经固化的表观遗传及转录状态，但可以系统性地激活外周CD8+T细胞的应答，肿瘤引流淋巴结（tumor-draininglymphnodes，TdLNs）作为系统性免疫应答反应发生的重要场所，也被发现在PD-1/PD-L1阻断治疗中发挥了作用。<br>　　在本研究中，我们利用表达模式抗原的小鼠黑色素瘤细胞系B16.GP（稳定表达小鼠LCMV病毒GP抗原）建立了小鼠皮下肿瘤模型，结合Tcf7-GFP-P14细胞（特异性识别H-2DbGP33–41表位）的过继转输，通过流式细胞术，检测在肿瘤进展过程中肿瘤抗原特异性CD8+T细胞的免疫表型、维持、功能状态等特性。我们发现在荷瘤小鼠TdLNs中有一群表达TCF-1的肿瘤特异性CD8+T细胞，其形成于早期活化阶段，与LCMV-Armstrong急性病毒感染时诱导的经典记忆CD8+T细胞类似，表达记忆相关表面标志IL7Rα（CD127）、IL2Rβ（CD122）、CD62L和关键转录因子TCF-1、Eomes，并且具有抗原非依赖性的稳态增殖能力和强大的快速增殖潜能，在相同抗原再次攻击时，能够产生二次应答，为机体提供保护。此外，这群细胞不表达效应分子KLRG1、GzmB（granzymeB，颗粒酶B）和多个抑制性分子如Tim-3、CD39、Lag3、2B4、TOX等，与急性感染形成的效应性CD8+T细胞、慢性感染或TME产生的耗竭CD8+T细胞有根本区别。因此，我们将这一存在于引流淋巴结中、具有记忆性特征的肿瘤抗原特异性的TCF-1+CD8+T细胞亚群命名为TdLN-TMEM细胞（TumordraininglymphnodememoryCD8+Tcells）。<br>　　进一步，我们创新性地使用肿瘤移植、淋巴结切除等实验方法，研究TdLN-TMEM细胞分化状态和其响应ICB的潜力。我们观察到，TdLN-TMEM细胞能够分化为肿瘤组织浸润各耗竭细胞亚群，并且肿瘤移植或淋巴结切除后，TME中的耗竭CD8+T细胞不能自我维持，而是依靠TdLN-TMEM细胞源源不断的补充，证明TdLNs是肿瘤中浸润的CD8+T细胞的来源。基于此，我们通过TdLN-TMEM细胞的过继转移，发现TdLNs中抗原特异性的CD8+T细胞可以有效控制肿瘤生长，具有强大的治疗潜力。此外，在PD-L1抗体阻断治疗后，TdLNs中的抗原特异性CD8+T细胞可以扩增并通过循环进入到肿瘤中，但是肿瘤中浸润的、已经耗竭的细胞却不能有效扩增。体外PD-1阻断实验也佐证了这个结论，PD-1抗体处理后，TdLNs来源的肿瘤抗原特异性CD8+T细胞可以增殖，而相应从肿瘤组织中分离出的细胞不能很好应答。并且，TdLNs的摘除使PD-L1抗体介导的抗肿瘤作用消失，而回输TdLN-TMEM细胞可以使作用恢复，证实了TdLN-TMEM在响应PD-1/PD-L1免疫检查点阻断治疗中的关键作用。<br>　　本研究首次鉴定了肿瘤负荷下存在于肿瘤引流淋巴结内、具有记忆细胞潜力的、非耗竭的肿瘤特异性CD8+T细胞，PD-1/PD-L1阻断抗体可以扩增并动员其侵入肿瘤组织而抵抗肿瘤，是真正响应ICB的关键细胞亚群，加深了我们对抗肿瘤免疫应答的理解，为提高肿瘤免疫治疗的效力提供了新的方向和启发。