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摘要哈蟆油（Oviductus Ranae,OR）为蛙科动物中国林蛙（Rana temporaria chensinensis）雌蛙的输卵管，经釆制干燥而得，具有“补肾益精，养阴润肺”功效的一种传统中药材。哈蟆油水提物是哈蟆油超声破碎离心后得到的水提物，其主要成分是蛋白质，是哈蟆油的重要成分之一。环磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）是最常用的烷化剂类抗肿瘤药物之一，研究表明可以用其引起卵巢功能急性损伤的干扰及卵巢早衰动物模型的建立。本论文旨在通过对小鼠进行哈蟆油水提物溶液灌胃饲养，检测CTX诱导的卵巢早衰小鼠的血清激素水平、卵巢等器官组织学变化，为揭示哈蟆油对卵巢早衰的保护作用提供科学依据。<br>　　哈蟆油冻干后粉碎，过100目筛，在粉末中以物液比1∶50加入蒸馏水，充分搅拌均匀后超声破碎45min，3000r离心15min，取上清后冻干36h，使用冻干产物重量除以使用的哈蟆油重量得出哈蟆油水提物的产出率15.12±1.37%；按1∶20配制溶液，通过凯氏定氮法和BCA试剂盒法测得冻干后的哈蟆油水提物中粗蛋白含量为66.21±0.81%；物液比为1∶20的哈蟆油水提物溶液蛋白浓度为3.27±0.53mg/ml。<br>　　选取42只8周龄雌性昆明小鼠，分为空白对照组，雌激素组，模型组，预保护对照组，阳性对照组，预保护组，每组7只。每组小鼠于每天饲喂相同日粮，保证饲料和饮水充足。前14d每天固定时间按照分组对小鼠进行灌胃，后14d每天固定时间按照分组对小鼠进行腹腔注射制造卵巢早衰模型，每日对采食量、体重变化进行记录。处死后进行采血、解剖采样，并使用采得的组织、血清等进行激素指标、卵巢早衰相关基因表达能力、卵巢、子宫等器官的组织学变化进行分析。<br>　　小鼠饲养结果显示：灌胃哈蟆油水提物对小鼠生长具有明显促进作用（P＜0.05）；注射环磷酰胺的组别体重均明显呈下降趋势（P＜0.05）；与模型组比较，阳性对照组与预保护组组子宫指数、卵巢指数均增加(P＜0.05)，且预保护组比阳性对照组更明显。<br>　　小鼠血清中激素测定结果显示：与空白对照组相比，环磷酰胺CTX能使小鼠血清中促卵泡素FSH、促黄体生成素LH、睾酮T、催乳素PRL的含量显著提高（P＜0.05），雌二醇E2、抗缪勒管激素AMH和孕酮P的含量显著降低（P＜0.05）；预保护组能使小鼠血清中雌二醇E2、抗缪勒管激素AMH和孕酮P含量显著高于模型组（P＜0.05），能使小鼠血清中促卵泡素FSH、促黄体生成素LH、睾酮T、催乳素PRL的含量显著低于模型组（P＜0.05）；与阳性对照组相比，预保护组能显著降低血清中促黄体生成素LH含量（P＜0.05），与模型组相比，预保护组与阳性对照组均能显著提高血清中抗缪勒管激素AMH含量，（P＜0.05）。<br>　　对卵巢、子宫及肝脏组织中卵巢早衰相关基因Bax、bal-2、CYP7B1、Gpr3、GDF-9等表达能力的检测得出以下结果：与空白对照组相比，CTX能够显著降低小鼠卵巢中卵巢早衰相关基因Bax、CYP7B1、GDF-9、Akt、Hmf1、mTOR、PDK1及小鼠子宫中卵巢早衰相关基因bal-2、CYP7B1、GDF-9、Akt、GDF-9的相对表达量（P＜0.05）；提前灌胃哈蟆油水提物能够显著提高卵巢早衰小鼠卵巢中相关基因Bax、PI3K、PDK1、Akt、Hmf1、mTOR及小鼠子宫中卵巢早衰相关基因Akt、Bax、bal-2、CYP7B1、GDF-9、Hmf1、PI3K的相对表达量（P＜0.05）；与空白对照组相比，CTX能够显著升高小鼠卵巢中卵巢早衰相关基因Gpr3以及小鼠子宫中卵巢早衰相关基因Bax、mTOR、PDK1的相对表达量（P＜0.05）；提前灌胃哈蟆油水提物能够显著降低小鼠卵巢中卵巢早衰相关基因Gpr3以及小鼠子宫中卵巢早衰相关基因mTOR的相对表达量（P＜0.05）；与空白对照组相比，CTX对于小鼠肝脏中的Akt、mTOR基因相对表达量具有明显的降低作用（P＜0.05），能够显著升高小鼠肝脏中相关基因PDK1的相对表达量（P＜0.05）；灌胃哈蟆油水提物能够显著提高小鼠肝脏中的Akt、mTOR、PI3K基因的相对表达量（P＜0.05）。<br>　　小鼠卵巢及子宫组织学研究结果如下：与空白对照组比较，模型组卵巢体积明显缩小，成熟卵泡少，卵泡颗粒细胞层较正常减少，排列紊乱，部分卵泡发育不良，卵巢间质可见较多淋巴细胞及浆细胞浸润，且始基卵泡及窦状卵泡、窦前卵泡明显减少，闭锁卵泡明显增多（P＜0.05），同时可见发育较差的卵泡，形态不规则，说明模型组卵巢内结构已受损（P＜0.05）；与模型组比较，预保护组灌胃哈蟆油水提物后始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡明显增多，闭锁卵泡数目明显减少，有显著性差异（P＜0.05）；与空白对照组相比，模型组子宫组织固有层中子宫腺体明显减少，内膜及子宫肌层变薄，基质中血管少，基质细胞数量少、子宫体积萎缩，结缔组织不丰富；与模型组比较，预保护组灌胃哈蟆油水提物后子宫内膜固有层腺体增多，腺腔增大，腔内分泌物多，基质疏松，基质细胞体积增大，螺旋动脉多见，毛细血管丰富；与阳性对照组相比，预保护组子宫组织，子宫腔大，结缔组织丰富。<br>　　综上，哈蟆油水提物对CTX诱导的卵巢早衰小鼠的卵巢以及子宫具有一定的保护作用。