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摘要维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)作为一种革兰氏阴性的条件致病菌，能够感染人、兽、鱼及两栖动物等水生动物。给水产养殖业带来经济损失的同时，也严重威胁着食品健康安全。随着A.veronii的感染率升高，相关的研究报道也逐渐增多，但对其毒力因子的挖掘还有待补充。<br>　　LsrB是由lsrB基因编码的一种高亲和力底物结合蛋白，作为ABC运输系统的底物结合蛋白，主要负责细胞外AI-2(Autoinducer-2,AI-2)的内化。当LsrB受体在细胞外AI-2积累到一个阈值浓度时，LsrB与AI-2结合，然后通过Lsr ABC传输系统引入细胞，导致基因表达发生变化。相关研究表明，lsrB基因可以影响细菌产生物被膜能力，毒力因子的产生和致病性等。为维持体内铁平衡，细菌进化出了有效的铁摄取与存储蛋白：细菌铁蛋白(Bacterioferritin,Bfr）<br>　　本试验选取了差异蛋白分析中筛选出可能与毒力密切相关的bfr和lsrB基因，并利用自杀性质粒pRE112和广宿主表达质粒pBBR1-MCS构建基因缺失突变体，并对缺失株、互补株及野生株的生物学特性进行比较研究，试验发现：bfr与lsrB基因缺失后对药物敏感性及细菌的生长能力无明显差异，但都会减弱细菌的游动能力。且bfr基因缺失后，菌株对甘氨酸-AMC（GLYB）代谢呈阳性。<br>　　在透射电镜下都可观测到两基因缺失株鞭毛结构破坏，利用RT-qPCR进一步对缺失株的15对鞭毛形成相关基因表达量检测，发现flgL、flgK、flgE、flgF、flgG、motA、motB、fliE、fliG、flgB、flgC、fliM、flhB、flaA和flaB基因表达全部上调，并未发现下调基因，推测bfr与lsrB基因通过调控鞭毛基因表达来影响细菌的运动能力。<br>　　96孔板检测细菌的生物被膜形成的结果表明，Δbfr和ΔlsrB生物被膜膜形成量较野生型TH0426菌株有显著差异(p＜0.01)，，而互补株生物被膜形成能力有所恢复，说明该基因与生物被膜形成相关，通过扫描电镜可以清晰的观察到缺失株的菌体间连接松散，且形态不一。<br>　　lsrB基因缺失后对EPC细胞的黏附与侵袭显著下降(p＜0.01)；细菌与EPC细胞作用30min、1h和2h时后，细胞毒性均显著下降；斑马鱼试验发现，bfr基因缺失后LD50升高了2.06倍，lsrB基因缺失后LD50升高了1.28倍，毒力明显降低。<br>　　成功地构建了bfr和lsrB基因缺失株和互补株，并对野生株、缺失株和互补株进行了比较，发现基因缺失显著降低了运动性、生物被膜形成能力、与EPC细胞粘附和致病性。为防治A.veronii的感染，开发淡水鱼用减毒活疫苗提供理论依据。