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摘要目的：<br>　　1.分别观察黑色素瘤小鼠与正常小鼠的脾脏淋巴细胞对于黑色素瘤细胞的抑制效应。<br>　　2.比较黑色素瘤小鼠与正常小鼠的脾脏淋巴中CD4+与CD8+的比例占比。<br>　　3.探讨刀豆蛋白A刺激黑色素瘤小鼠和正常小鼠的脾脏淋巴细胞，检测PD-1、穿孔素、颗粒酶B、TNF-α和IFN-γ的表达水平的差异。<br>　　方法：<br>　　1.培养B16细胞，构建黑色素瘤荷瘤小鼠模型，并提取正常小鼠脾脏淋巴细胞（Spleen lymphocytes of normal mice;NL）以及黑色素瘤小鼠脾脏淋巴细胞（Splenic lymphocytes from melanoma mice;ML）。<br>　　2.B16细胞分别与NL和ML按照1∶20共培养，并加入刀豆蛋白A（Concanavalin A;ConA）刺激24h，CCK8检测各组细胞活力，Calcein/PI荧光染色同步检测；<br>　　3.流式细胞术检测NL/ML中CD4+、CD8+比例占比；ConA刺激NL/ML24h，Western blot检测PD-1、颗粒酶B、穿孔素的表达水平，流式细胞术检测CD8+T淋巴细胞中颗粒酶B、穿孔素的表达水平，ELISA检测TNF-α、IFN-γ表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.CCK-8检测结果：ML组与对照组以及NL组相比较，B16细胞增殖能力均显著下降，差异有统计学意义（Plt;0.05）；在加入ConA（5μg/ml）刺激24h后，B16细胞在ML组中增殖与NL组对比显著下降，差异有统计学意义（Plt;0.05）。<br>　　2.Calcein/PI荧光染色：在未经过ConA刺激下，NL组和ML组中B16细胞增殖均明显受到抑制，B16细胞在ML组中的增殖与NL组相比有更明显的抑制现象；在共培养的同时加入ConA（5μg/ml）刺激24h之后，在NL组和ML组中，B16黑色素瘤细胞增殖能力均明显受抑制。<br>　　3.流式细胞术检测NL/ML中CD4+、CD8+比例占比结果：ML组中CD8+T淋巴细胞高于NL组中CD8+T淋巴细胞的比例占比，差异有统计学意义（Plt;0.05）；而ML组中CD4+T淋巴细胞相对于NL组中CD4+T淋巴细胞的比例占比，差异无统计学意义（Pgt;0.05）。<br>　　4.Western blot结果：与NL组相比，ML组中PD-1蛋白表达水平显著下调，而穿孔素蛋白表达水平显著上调，差异有统计学意义（Plt;0.05），未经ConA刺激活化脾脏淋巴细胞几乎不表达颗粒酶B;在ConA（5μg/ml）刺激活化24h后，ML组PD-1蛋白表达水平依旧较NL组显著下调，并且穿孔素、颗粒酶B均显著上调，差异有统计学意义（Plt;0.05）。<br>　　5.流式细胞术检测CD8+T淋巴细胞中颗粒酶B、穿孔素表达差异结果：在NL、ML的CD8+T淋巴细胞中，在未经过ConA刺激活化时几乎不表达颗粒酶B，而ML组中CD8+T淋巴细胞表达穿孔素的水平相对于NL组显著上升，差异有统计学意义（Plt;0.05）；在ConA刺激24h后，ML组中CD8+T淋巴细胞表达颗粒酶B、穿孔素的水平均相对于NL组显著上升，差异有统计学意义（Plt;0.05）。<br>　　6.ELISA结果：在未经ConA刺激活化条件下,ML组中TNF-α细胞因子表达水平较NL组差异有统计学意义（Plt;0.05），而IFN-γ较NL组差异无统计学意义（Pgt;0.05），在ConA（5μg/ml）刺激活化24h后，ML组中TNF-α、IFN-γ细胞因子的表达水平都较NL组显著上升，差异有统计学意义（Plt;0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.ML相对于NL具有更明显的抑瘤效应。<br>　　2.ML相对于NL诱导分化更多CD8+T细胞以及低表达PD-1。<br>　　3.在ConA刺激后，ML相对于NL上调穿孔素、颗粒酶B，分泌更高的TNF-α、IFN-γ。