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摘要【目的】<br>　　1.筛选调控棕色脂肪细胞形成的候选小分子化合物。<br>　　2.对候选小分子柚皮素促进棕色脂肪细胞形成的作用进行验证。<br>　　3.对候选小分子柚皮素促进棕色脂肪细胞形成的作用机制进行初步探讨。<br>　　【方法】<br>　　1候选小分子筛选：从GEO数据库下载贝沙罗汀（bexarotene，简称Bex）促进棕色脂肪细胞形成的基因表达谱：GSE52364，分析其中1.5倍差异表达谱。将该差异表达谱转换为C-Map数据库可识别的AFFYMETRIXHG-U133A芯片探针集。利用此探针集在C-Map数据库中检索得到关联性最大的十种正相关的小分子化合物。选择候选中药分子柚皮素（naringenin）进行后续实验。<br>　　2.柚皮素促进棕色脂肪细胞形成作用验证：建立C3H10T1/2间质干细胞和pre-BAT棕色前体脂肪细胞分化模型，利用CCK-8实验确定柚皮素的实验浓度，镜下观察不同浓度柚皮素对C3H10T1/2细胞和pre-BAT细胞成脂分化的影响，采用RT-qPCR和Westernblot方法检测棕色脂肪细胞成熟标志基因UCP1、ELOVL3及脂肪分化标志基因FABP4表达。<br>　　3.柚皮素促进棕色脂肪细胞形成作用机制探讨：RT-qPCR法检测柚皮素对棕色脂肪分化相关转录因子PGC-1α、PPARα等表达；Westernblot检测棕色脂肪细胞分化信号通路P38、ERK1/2表达。利用重组慢病毒建立干扰PGC-1α基因C3H10T1/2间充质干细胞的稳定株，探索其对棕色脂肪细胞形成的影响。<br>　　【结果】<br>　　1.获得调控棕色脂肪细胞形成的基因表达谱及相应探针集。<br>　　2.通过C-Map预测得到可能具有促进棕色脂肪形成作用的十个候选小分子化合物，柚皮素为其中之一。<br>　　3.柚皮素在100μM浓度以下对C3H10T1/2细胞和pre-BAT细胞活性不产生显著影响。<br>　　4.柚皮素25μM-100μM对C3H10T1/2细胞和pre-BAT细胞的棕色脂肪细胞成熟标志基因UCP1、ELOVL3、COX7a1等和脂肪分化标志基因FABP4的表达具有明显促进作用。<br>　　5.柚皮素对C3H10T1/2细胞和pre-BAT细胞的PGC-1α的表达具有明显促进作用，敲低PGC-1α明显降低棕色脂肪相关基因表达。<br>　　6.柚皮素对P38、ERK1/2信号通路没有明显影响。<br>　　【结论】<br>　　1.联合基因表达谱和C-Map数据库生物信息学筛选获得调控棕色脂肪形成候选小分子，其中包括柚皮素。<br>　　2.在C3H10T1/2细胞和pre-BAT细胞的棕色脂肪分化模型中，柚皮素能促进棕色脂肪标志基因的表达。<br>　　3.柚皮素通过转录因子PGC-1α介导棕色脂肪形成。