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摘要【研究背景】<br>　　肺动脉高压（pulmonaryhypertension，PH）是一大类主要以肺动脉压力和肺血管阻力增高为临床特点的病理生理综合征，其发病的主要病理机制，早期以肺动脉痉挛收缩为主，后期则出现肺动脉内、中、外膜增生肥厚，最终导致以血管腔狭窄为主的血管重塑，整个过程伴或不伴血管内原位血栓形成。肺动脉高压涉及疾病范围广，危害大，临床上缺乏有效的治疗手段。新型靶向药物（钙离子通道阻滞剂、前列环素、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂）效果并不理想，且价格昂贵，在我国无法广泛使用。因此寻找新的经济有效的治疗肺动脉高压的药物，具有十分重要的意义。<br>　　根据临床指南，将PH分为五大类，而肺部疾病和/或低氧引起的PH被分为Ⅲ型PH。研究表明，长期慢性低氧是该型PH的重要特征和诱因。在低氧相关肺动脉高压中，低氧诱导的肺血管重塑是导致疾病进展的核心机制。近二十年间的研究发现，低氧诱导因子（hypoxiainduciblefactors,HIFs）是一类经典的低氧响应蛋白家族，其在哺乳动物细胞中广泛表达，并在低氧状态下发挥转录因子活性，通过调控细胞的基因表达网络调节细胞对低氧的反应。我们和其他课题组前期研究表明，低氧诱导的HIFs信号通路活化可通过影响肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecells，PASMCs）、肺动脉内皮细胞（pulmonaryarterialendothelialcells，PAECs）的功能，促进PH的疾病进程。在其他研究人员和本组前期研究中发现，低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α在PASMCs和PAECs中具有差异性表达，且对p53存在差异性调控。在PAECs中，低氧诱导HIF-2α大量聚积并介导HIF-2α依赖性的p53上调，是导致PAECs凋亡的重要诱因；而在PASMCs中，低氧诱导的HIF-1α大量表达导致p53下调，促进PASMCs增殖。近年来的研究报道特异性HIF-2α抑制剂和p53激动剂可作为新型肺动脉高压治疗药物，显著缓解了PH动物模型的疾病指征。然而，鉴于HIF-2α的内皮特异性表达，我们分析HIF-2α抑制剂可能缺乏直接的PASMCs靶向效果，而p53激动剂可能存在无差别的PAECs促凋亡副作用。因此，本研究联合应用了HIF-2α抑制剂和p53激动剂，试图探寻一种更为有效的治疗途径。<br>　　【研究目的】<br>　　对比联合应用HIF-2α抑制剂和p53激动剂与单独用药的治疗效果，探索联合用药对血管保护性的可能机制，探索HIF-2α与p53的串联作用，为肺动脉高压治疗提供新的临床思路。<br>　　【研究方法】<br>　　使用hPAECs及hPASMCs作体外细胞模型，观察药物在两种细胞内的作用效果。制作SU5416联合低氧诱导的PH模型（SuHx-PH）及不同药物联合或单独治疗的体内动物模型。在造模结束后使用经颈静脉右心导管测得的右心室收缩压（rightventricularsystolicpressure，RVSP）判断造模效果及治疗效果。用小动物超声测定大鼠肺动脉高压及右心结构与功能的各项评价指标，观察不同药物治疗SuHx-PH大鼠心脏彩超右心结构与功能各项指标、血流动力学、肺和心脏组织病理学、肺组织流式细胞术等各项指标。并取模型老鼠肺部血管进行血管张力实验，探寻不同药物治疗对SuHx-PH大鼠血管内皮细胞的保护作用及联合应用药物可能的作用机制。<br>　　【研究结果】<br>　　1、低氧时hPAECs中p53信号通路的上调由HIF-2α介导。<br>　　2、PT2385不影响HIF-2α和p53的mRNA表达，抑制低氧状态诱导的p53信号通路蛋白上调，其可能通过减少p53蛋白降解产生作用。<br>　　3、使用p53激动剂后hPAECs凋亡水平增加，而PT2385可以抑制低氧、CoCl2、Nutlin3a诱导的hPAECs中p53信号通路活化；使用PT2385不影响缺氧产生的hPASMCs中p53信号通路上调和增殖增加。<br>　　4、PT2385与Nutlin3a两种药物联合治疗相对单独用药表现出更好的降低肺动脉高压大鼠右心室压力和保护右心功能的效果。<br>　　5、PT2385与Nutlin3a两种药物联合治疗相对单独用药更大程度改善了肺动脉高压大鼠肺血管重塑，保护了血管舒张功能。<br>　　6、PT2385与Nutlin3a两种药物联合治疗同时表现出保护内皮损伤和抑制平滑肌增殖的效果。<br>　　7、SuHx-PH-6w的大鼠较SuHx-PH-3w大鼠有更严重的肺动脉高压病理变化，使用PT2385与Nutlin3a联合治疗部分逆转了这一进程。<br>　　【研究结论】<br>　　HIF-2α抑制剂和p53激动剂二者联用可既保留HIF-2α抑制剂的内皮保护作用和p53激动剂的抗平滑肌增殖作用，又最大限度的减弱p53激动剂的促内皮细胞凋亡副作用。与单用方案相比，联合应用HIF-2α抑制剂与p53激动剂是一种更加高效、安全的肺动脉高压精准治疗策略。